Question

（1）在植物基因工程中，构建重组Ti质粒时，通常要用         分别切割                   和Ti质粒，再用                  进行连接。

（2）动物细胞体外培养时，要保证被培养的细胞处于              的环境，在营养方面最终需在培养基中加入             等天然成分。细胞培养需在适宜的理化条件下进行，此外还需要一定的气体环境，其中C0₂的主要作用是                         。

Answer

（1）（同种）限制酶 含目的基因的DNA分子 DNA连接酶

（2）无菌、无毒 血清（或血浆） 维持培养液的Ph

【解析】

试题分析：（1）构建重组质粒需要用限制酶分别切割目的基因和Ti质粒，再用DNA连接酶进行连接。

（2）动物细胞培养时要保证无菌、无毒，所以可以加入一定量的抗生素保证无菌，通过定期更换培养液保证无毒。还需要加入天然成分血浆或血清。培养时需要一定的二氧化碳是为了维持培养液的PH。

考点：本题考查基因工程和细胞工程相关知识，意在考察考生对知识点的识记理解掌握程度。

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（1）限制酶是一类酶，而不是一种酶。

（2）限制酶的成分为蛋白质，其作用的发挥需要适宜的理化条件，高温、强酸或强碱均易使之变性失活。

（3）在切割目的基因和载体时要求用同一种限制酶，目的是产生相同的黏性末端。

（4）将一个基因从DNA分子上切割下来，需要切两处，同时产生4个黏性末端。

（5）不同DNA分子用同一种限制酶切割产生的黏性末端都相同，同一个DNA分子用不同的限制酶切割，产生的黏性末端一般不相同。

（6）限制酶切割位点应位于标记基因之外，不能破坏标记基因，以便进行检测。

（7）基因工程中的载体与细胞膜上物质运输的载体不同。基因工程中的载体是DNA分子，能将目的基因导入受体细胞内；膜载体是蛋白质，与细胞膜的通透性有关。

（8）基因工程中有3种工具，但工具酶只有2种。

2．动物细胞培养条件

（1）无菌、无毒的环境：对培养液和所有培养用具进行无菌处理，添加抗生素，定期更换培养液以清除代谢产物。

（2）营养：除正常的有机和无机营养外，加入血清、血浆等一些天然成分。

（3）适宜的温度和pH：温度为36．5±0．5_℃（哺乳动物），pH为7．2～7．4。

（4）气体环境：含95%空气加5%CO2的混合气体，其中后者的作用是维持培养液的pH。