Question

为增加油菜种子的含油量，研究人员尝试将酶D基因与位于叶绿体膜上的转运肽基因相连，导入油菜细胞并获得了转基因油菜品种。

（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用       技术从陆地棉基因文库中获取酶

D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因，所含三种限制酶（ClaI、SacI、XbaI）的切

点如下图所示。则用           和          酶处理两个基因后，可得到          端与

         端（填图中字母）相连的融合基因。

（2）将上述融合基因插入右上图所示Ti质粒的T-DNA中，构建               并导入农杆菌中。将获得的农杆菌接种在含          的固体培养基上培养得到含融合基因的单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的侵染液。

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是                        。

（4）进一步筛选后获得转基因油菜细胞，该细胞通过            技术，可培育成转基因油菜植株。用                法在分子水平上可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达。

Answer

（1）PCR ClaⅠ DNA连接 A D

（2）基因表达载体（或“重组质粒”） 四环素

（3）利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞 植物组织培养

（4）抗原—抗体杂交

【解析】（1）研究人员依据基因的已知序列设计引物，采用PCR法从陆地棉基因文库中获取酶D基因，从拟南芥基因文库中获取转运肽基因．在上述引物设计时，分别在引物中加入如图甲所示酶的识别序列，这样可以用ClaⅠ限制酶和DNA连接酶处理两个基因后，得到A、D端相连的融合基因．

（2）将上述融合基因插入图乙所示Ti质粒的T-DNA中，构建表达载体即重组质粒并导入农杆菌中．将获得的农杆菌接种在含四环素的固体平板上培养得到单菌落，再利用液体培养基震荡培养，可以得到用于转化的浸染液．

（3）剪取油菜的叶片放入侵染液中一段时间，此过程的目的是利用农杆菌将融合基因导入油菜细胞，进一步筛选后获得转基因油菜．

（4）用抗原-抗体杂交法可检测转基因油菜植株中的融合基因是否成功表达．

【考点定位】基因工程的原理及技术

【名师点睛】基因文库包括cDNA文库、基因组文库等．某个群体包含一种生物所有的基因的文库叫基因组文库，而用某种生物发育的某个时期的mRNA反转录产生的多种互补DNA片段属于cDNA文库．