Question

人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：

（1）htPA基因与载体用______________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用______________技术。

（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其___________。采集的精子需要经过___________，才具备受精能力。

（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是_____________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_____________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的_____________。

（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到_____________，说明目的基因成功表达。

Answer

（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶） DNA分子杂交（或核酸探针）

（2）超数排卵 获能

（3）显微注射法 性别鉴定 全能性

（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物）

【解析】（1）htPA基因与载体需要用同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）切割，形成相同的黏性末端，然后再通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交（或核酸探针）技术，原理是碱基互补配对。

（（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵。采集的精子需要经过获能（处理），才具备受精能力。

（3）将目的基因导入受精卵的方法是显微注射法，为获得母羊，所以胚胎移植前需要进行性别鉴定，利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的全能性。

（4）基因表达成功时可获得目的基因的产物，既在转htPA基因母羊的羊乳中检测到htPA（或人组织纤溶酶原激活物），说明目的基因成功表达。

【考点定位】基因工程的应用；胚胎移植

【名师点睛】DNA重组技术至少需要三种工具：限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶、运载体。

目的基因分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。