Question

EPO是促红细胞生成素（Erythropoietin）的英文简称，是一种激素样物质，可促进体内新红细胞生成。人类已可通过基因工程合成EPO基因，并采用中国仓鼠卵巢（CHO）细胞表达系统来获取产物。其过程如下：

请回答下列问题：

（1）从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到____________，再通过PCR技术获得大量EPO基因。

（2）供体母鼠通常情况下每次排卵8～12枚，为使其超数排卵，需注射_____________激素 以排出更多的卵子，培养到_____________时期与获能的精子相遇时，精子首先发生___________反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精。

（3）①过程构成了基因表达载体，内部包括不可缺少的组成部分，其中___________能驱动基因的转录。   （4）采用________技术，将重组表达载体导入小鼠受精卵中，将受精卵移入发育培养液中继续培养。培养液成分除一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸等营养成分，以及_______等物质。

（5）当胚胎发育至__________时期，向受体移植，为获得更多个转基因胚胎，要将__________均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行_________。

Answer

（1）cDNA

（2）促性腺，减数第二次，顶体

（3）启动子

（4）显微注射，血清

（5）桑椹胚或囊胚，内细胞团，性别鉴定

【解析】（1）获取目的基因的方法可通过反转录法，故从人体组织中提取EPO的mRNA，通过逆转录得到cDNA，再通过PCR技术获得大量EPO基因。

（2）为使供体母鼠超数排卵，需注射促性腺激素以排出更多的卵子，卵子需培养到减数第二次分裂中期时才能与获能的精子相遇时，精子首先发生顶体反应，穿越放射冠和透明带，完成体外受精。

（3）①过程为形成基因表达载体的过程，基因表达载体包括启动子、终止子等，其中启动子为RNA聚合酶结合的部位，能驱动基因的转录。

（4）

（5）胚胎移植时一般在桑椹胚或囊胚时期，为获得更多转基因胚胎，要将囊胚的内细胞团均等切割，否则会影响分割后胚胎的恢复和进一步发育。此外，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定。

【考点定位】基因工程的原理及技术；胚胎移植

【名师点睛】基因工程技术的基本步骤：

1、目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

2、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

3、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

4、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。