Question

【加试题】下列文题有关大肠杆菌的培养实验，请回答：

（1）配制培养大肠杆菌的培养基时，根据“细菌喜荤，霉菌喜素”的规律，通常在培养基中加入蛋白胨和

作为营养物质，为维持一定的滲透压，常需加入一定量的         。

（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在           中进行扩大培养，培养液经         后，在LB固体培养基上进行        ，并将培养皿         放在恒温培养箱中培养，可以获得如图效果。 为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及           ，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。

（3）通常对获得的纯菌种可以依据         的形状、大小等特征进行初步的鉴定。

（4）关于“大肠杆菌培养和分离”的操作中，下列叙述正确的是（     ）

A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖

B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上

C．为了防止污染，接种工具精火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落

D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上

（5）科学家利用转基因技术，利用大肠杆菌生产胰岛素，其过程如下图。由甲和载体乙拼接形成的丙通常称为            ，构建得到丙时必需的工具酶有            。在此过程中，用来处理丁以增加细胞壁通透性的化学试剂是（       ）

A．氯化钠          B．氯化钙         C．次氯酸钠        D．纤维素酶

Answer

（14分，除说明外，每空1分）

（1）酵母提取物 NaCl

（2）LB液体培养基 稀释 涂布分离 倒置 无菌操作是否规范

（3）菌落 （4）D（2分） （5）重组质粒 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 B （2分）

【解析】

试题分析：（1）由题意“细菌喜荤”可知：该大肠杆菌为异养细菌，需要的有机营养物质应取自动物性营养，因此配制培养大肠杆菌的培养基时，通常在培养基中加入蛋白胨和酵母提取物等作为营养物质；为维持一定的滲透压，常需加入一定量的NaCl。

（2）大肠杆菌培养和分离的实验中，在LB液体培养基中进行扩大培养，培养液经稀释后，在LB固体培养基上进行涂布分离，并将培养皿倒置放在恒温培养箱中培养，可以获得右图效果。为了检测接种、培养过程是否受杂菌污染以及无菌操作是否规范，应同时将未接种的培养基放入恒温培养箱培养。

（3）固体培养基上生长的微生物能形成菌落，菌落的形状、大小、颜色、软硬等特征可用于菌种的鉴定。

（4）高压灭菌加热结束时，切断热源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降到零时，打开放气阀。旋松螺栓，开启锅盖，A项错误；倒平板时，左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基导入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖，B项错误；为了防止污染，接种工具精火焰灭菌后应在火焰旁冷却后挑取菌落，C项错误；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D项正确。

（5）图中的甲为目的基因，载体乙通常为质粒，因此甲和载体乙拼接形成的丙通常为重组质粒；构建得到重组质粒时必需的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。丁即大肠杆菌为转基因技术中的受体细胞，为了增加其细胞壁的通透性，用于处理的化学试剂是氯化钙，即B选项。

考点：本题考查微生物的培养与应用、基因工程的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。