Question

回答下列（一）、（二）小题：

（一）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中，经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图1所示）

（1）图1中,为达到筛选目的,平板内的固体培养基应以     作为唯一碳源。②、③过程需重复几次,目的是                 。

（2）某同学尝试过程③的操作,其中一个平板经培养后的菌落分布如图2所示。该同学的接种方法是         ；推测该同学接种时可能的操作失误是         。

（3）以淀粉为原料,用工程酵母菌和普通酵母菌在相同的适宜条件下密闭发酵,发酵罐需要先排气,其原因是              。

（4）上述工程酵母菌培养过程中，有关操作正确的是

A．玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌

B．培养基分装到培养皿后进行灭菌

C．倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行

D．获得的菌种如果需要保存，可置于37℃恒温保存

（二）下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题：

（1）用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用             两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基因片段，通过             酶作用后获得重组质粒。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加               。

（3）若BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为          ，对于该部位，这两种酶               （填“都能”、“都不能”或“只有一种能”）切开。

（4）若用Sau3A I切图1质粒最多可能获得               种大小不同的DNA片段。

（5）基因工程中，某些噬菌体经改造后可以作为载体，其DNA复制所需的原料来自于             。

Answer

（一）（1）淀粉 筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种

（2）涂布分离法 涂布不均匀

（3）工程酵母菌利用淀粉的速度很快，发酵产生CO2的速度也很快

（4）C

（二）（1）Bcll和Hindlll DNA连接 （2）四环素

（3） 都不能 （4）7 （5）受体细胞

【解析】（一）（1）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌；②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌（或筛选出真正高效利用淀粉的工程酵母菌菌种）。

（2）由图2可知，该同学采用的接种方法是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的。

（3）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气。

（4）玻璃刮刀用火焰灼烧进行灭菌可能改变刮刀刚度，A项错误；培养基应在分装前进行灭菌，B项错误；倒平板和取菌液都必须在酒精灯火焰旁进行，C项正确；获得的菌种如果需要保存，一般置于4-6℃下保存，D项错误。

（二）（1）选择的限制酶应在目的基因两端存在识别位点，但BamH I酶可能使质粒中的启动子丢失，因此只能选BclI和HindⅢ两种限制酶切割；酶切后的载体和目的基因片段，通过DNA连接酶作用后获得重组质粒。

（2）为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，根据质粒上的抗性基因，应在平板培养基中添加四环素。

（3）根据BamH I和Bcl I酶切位点，BamH I酶切的DNA末端与Bcl I酶切的DNA末端连接，连接部位的6个碱基对序列为；与两种酶的酶切位点均不同，所以对于该部位，这两种酶都不能切开。

（4）根据BamH I、Bcl I和Sau3A I的酶切位点，Sau3A I在质粒上有3个酶切位点，完全酶切可得到记为A、B、C三种片段，若部分位点被切开，可得到AB、AC、BC、ABC四种片段，所以用用Sau3A I切图1质粒最多可能获得7种大小不同的DNA片段。

（5）噬菌体不能独立生活，必需依赖活细胞才能生存，所以其作为载体，其DNA复制所需的原料来自所导入的受体细胞。

【考点定位】微生物的分离与培养、基因工程的原理和技术