Question

回答下列（一）、（二）小题：

(一)某科研团队利用植物细胞工程技术，把基因序列已知的抗除草剂（Bar）基因导入原生质体获得抗除草剂大豆。请回答下列相关问题：

(1)对于已获得的Bar基因可以用         技术进行扩增。图中的a过程通常使用相同的         酶和DNA连接酶，使目的基因与载体连接形成重组DNA。

(2)在b过程中，获得原生质体除了需要纤维素酶和果胶酶，还需要用到的试剂是           。

(3)成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成Ⅰ             ,进而生长发育成植株。

下列不属于Ⅰ细胞应具有的特征是         。

A.薄壁细胞       B.细胞质丰富           C.液泡小        D.细胞核小

(4)若要判断转基因抗除草剂大豆是否成功，比较简便的检测方法是                。

(二)下图是“分离以尿素为氮源的微生物”实验的基本流程，请回答下列问题:

(5)该实验培养基不能含有        。

A.尿素       B.氯化钠        C.葡萄糖         D.琼脂

(6)尿素溶液可用             使之无菌。若要检查B过程灭菌是否彻底，可以采用的方法是         。

(7)图中步骤C为            。相对于划线分离法，过程D涂布分离法的优点是                   。

(8)如果菌落周围出现            色环带，说明该菌落能分泌脲酶。

Answer

（一）

（1）PCR 限制性核酸内切

（2）（较高浓度的）甘露醇

（3）愈伤组织 D

（4）用一定浓度的除草剂喷洒，观察转基因大豆的生长情况

（二）

（5）D

（6）G6玻璃漏斗过滤 将空白培养基放在适宜温度下培养一段时间，观察有无菌落出现

（7）倒平板 单菌落更易分开

（8）红

【解析】（一）(1) 可通过PCR技术进行体外扩增，获得大量Bar基因。a过程为构建基因表达载体，需要相同的限制性核酸内切和DNA连接酶，使目的基因与载体连接形成重组DNA。

（2）在获得植物原生质体时，需在0.5～0.6mol/L的甘露醇溶液环境（较高渗透压）下用纤维素酶和果胶酶混合液处理实验材料，将细胞壁消化除去，获得球形的原生质体。

（3）成功导入重组DNA的原生质体经脱分化形成愈伤组织，再经过再分化，分化出芽和根，进而生长发育成植株。

（4）Ⅰ细胞为愈伤组织，该类单细胞具有细胞质丰富、液泡小、细胞核大等特征，故D错误。

（二）（5）分离以尿素为氮源的微生物，需要液体培养基，不需要琼脂，D错误。

（6）尿素溶液可用G6玻璃漏斗过滤使之无菌，将空白培养基放在适宜温度下培养一段时间，观察有无菌落出现来检查B过程灭菌是否彻底。

（7）图中步骤C为倒平板，过程D为涂布分离法，均匀的涂布在培养基上，使得单菌落更易分开。

（8）鉴定尿素分解菌常采用酚红指示剂染色，使指示剂变红色，如果菌落周围出现红色环带，说明该菌落能分泌脲酶。

【考点定位】基因工程的原理及技术、植物细胞工程、微生物的分离和培养