Question

下图是培育表达人乳铁蛋白的乳腺生物反应器的技术路线。图中tet^R表示四环素抗性基因，Amp^R表示氨苄青霉素抗性基因，BAmHI、HinDIII、SmA I直线所示为三种限制酶的酶切位点。据图回答：

（1）图中将人乳铁蛋白基因插入载体，需用__________限制酶同时酶切载体和人乳铁蛋白基因。筛选含有重组载体的大肠杆菌首先需要在含____________的培养基上进行。能驱动人乳铁蛋白基因在乳腺细胞中特异性表达的调控因子是图中的____________。过程①采用的操作方法通常是_____________。

（2）过程②代表的生物技术是_____________。对早期胚胎进行切割，经过程②可获得多个新个体。目前最常见的是经分割产生的同卵______胎。

（3）为检测人乳铁蛋白是否成功表达，可采用____________技术。

（4）对代孕牛的要求是_________________。

Answer

（1）HinDⅢ和BAmHⅠ 氨苄青霉素 启动子 显微注射

（2）胚胎移植 双

（3）抗原—抗体杂交

（4）有健康体质和正常繁殖能力

【解析】（1）限制酶能同时切割目的基因和运载体，由图分析可知应用HinDⅢ和BAmHⅠ进行切割。由题意可知含有抗氨苄青霉素抗性，所以应先在含氨苄青霉素的培养基上进行初步选择。驱动基因进行表达的是启动子，它是RNA聚合酶识别和结合的位点，驱动基因的表达。要将重组载体导入到动物细胞中应用显微注射法。

（2）过程②是将早期胚胎移入到代孕母牛体内的胚胎移植技术。胚胎分割中目前最常见的是分割产生的同卵双胞胎。

（3）要检测目的基因是否表达成功，应用抗原-抗体杂交。

（4）对代孕母畜应要求具有有健康体质和正常繁殖能力。

【考点定位】本题考查基因工程和胚胎工程相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度。

【名师点睛】易错警示 规避与基因工程操作有关的7个失分点

（1）目的基因的插入位点不是随意的：基因表达需要启动子与终止子的调控，所以目的基因应插入到启动子与终止子之间的部位。

（2）基因工程操作过程中只有第三步（将目的基因导入受体细胞）没有碱基互补配对现象。

（3）原核生物作为受体细胞的优点：繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少。

（4）转化的实质是目的基因整合到受体细胞染色体基因组中。

（5）一般情况下，用同一种限制酶切割质粒和含有目的基因的片段，但有时可用两种限制酶分别切割质粒和目的基因，这样可避免质粒和质粒之间、目的基因和目的基因之间的

连接。

（6）不熟悉标记基因的种类和作用：标记基因的作用——筛选、检测目的基因是否导入受体细胞，常见的有抗生素抗性基因、发光基因（表达产物为带颜色的物质）等。

（7）还应注意的问题有：①基因表达载体中，启动子（DNA片段）≠起始密码子（RNA）；终止子（DNA片段）≠终止密码子（RNA）。②基因表达载体的构建是最核心、最关键的一步，在体外进行。