Question

下表为培养某种微生物的培养基配方，请回答有关问题：

KH2PO4	Na2HPO4	MgSO4·7H2O	葡萄糖	尿素	蒸馏水
1．4g	2．1g	0．2g	10．0g	1．0g	定容至1000mL

（1）该培养基只允许分解尿素的细菌生长，这种培养基称为_____________培养基。

（2）若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，上述培养基中还需要添加的成分是____________，接种时应采用 _____________法，该方法接种培养后的菌落，不可能是下图中的 _____________（单选）。

（3）从土壤中分离出分解尿素的细菌后，要对其作进一步的鉴定，可在上述培养基中加入_______________指示剂，培养该菌后，如果指示剂变________________，可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。

（4）某同学用0．1mL稀释液在稀释倍数为10⁶的平板中测得菌落数的平均值为163，则每mL样品中的细菌数是______________ 。

Answer

（1）选择 （2）琼脂 稀释涂布平板 D （3）酚红 （4）1．63×109

【解析】（1）分析培养基配方可知，该培养基以尿素为唯一氮源，只允许分解尿素的细菌生长，会抑制不能分解尿素的其它种类微生物生长，因此这种培养基称为选择培养基。（2）上述培养基中缺少凝固剂，为液体培养基。若要通过统计培养基中菌落数来估计样品中的细菌数，应使用固体培养基，因此在上述培养基中还需要添加琼脂。常用稀释涂布平板法来统计样品中活菌的数目。从图中信息可知，A、B、C图采用的是稀释涂布平板法，D图采用的是平板划线法，所以用稀释涂布法平板法纯化微生物时得到的菌落不可能是D。（3）对分离的菌种作进一步的鉴定，在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂，培养该菌后，如果指示剂变红，说明该菌合成的脲酶将尿素分解成了氨，使培养基的PH升高，即可初步鉴定该种细菌能够分解尿素。（4）某同学用0．1mL稀释液在稀释倍数为106的平板中测得菌落数的平均值为163，则每mL样品中的细菌数是：163÷0．1×106=1．63×109个。

【考点定位】微生物的培养与应用

【名师点睛】测定微生物数量的常用方法

（1）显微镜直接计数法

①原理:利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

②方法:用计数板计数。

③缺点:不能区分死菌与活菌。

（2）间接计数法（活菌计数法）

①原理:当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式:每克样品中的菌株数=（C÷V）×M,其中,C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数,V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL）,M代表稀释倍数。

③操作:设置重复组,增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确,一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。