Question

现有甲、乙两种可能有一定致畸、致癌作用的化学物质，利用动物细胞培养的方法能够鉴定它们是否有毒性，并比较二者毒性的强弱：请完成下列实验报告。

I．实验材料：小白鼠胚胎。

Ⅱ．药品用具：胰蛋白酶液、动物细胞培养液、动物细胞固定液、适宜浓度的龙胆紫溶液、滴管、培养皿、剪刀、锥形瓶、细胞培养箱、载玻片、盖玻片、光学显微镜、小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片。

Ⅲ．实验原理：                 ，根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。

Ⅳ．实验步骤：

（1）制备细胞悬液：把小白鼠胚胎放在培养皿中剪碎，转入锥形瓶中，加人胰蛋白酶液处理，使胚胎组织离散成单个细胞，再加入动物细胞培养液，制成细胞悬液。

（2）进行细胞培养：

①取A、B、C三个洁净的培养瓶，               。

②            。

③            。

（3）制作临时装片：

①当细胞繁殖到大约第8代左右时，同时从细胞培养箱中取出三个培养瓶，用胰蛋白酶液处理，使培养的细胞从瓶壁上脱落，再加入动物细胞固定液迅速杀死细胞，将细胞固定在不同的分裂时期。

②静置一段时间后，分别从各培养瓶底部吸取适量的细胞悬液。滴在与培养瓶有相同编号的载玻片中央，加1—2滴一定浓度的           染色，3—5 min后，盖上盖玻片，制成临时装片。

（4）镜检和统计：把临时装片放在显微镜下，寻找处于有丝分裂中期的细胞，并与               对比以确认发生上述变异的细胞，同时统计该期变异的细胞占细胞总数的百分数（Q值）。

V．实验结果：

培养瓶	A	B	C
Q值	1．3%	12．5%	0．1%

Ⅵ．实验结论：                。

Answer

Ⅲ．将有毒物质加入细胞培养液后，培养的动物细胞会发生染色体数量和结构变异（答出有毒物质使细胞发生变异）

Ⅳ．（2）①分别加入等量的细胞悬液（2分）

②向A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙，并将培养瓶摇匀；C瓶不作处理，作为对照（2分）

③把3个培养瓶放在37℃（或适宜温度）的细胞培养箱中培养 （2分）

（3）②龙胆紫溶液

（4）小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片

Ⅵ．甲、乙两种化学物质均有一定毒性，且乙的毒性比甲的毒性大（2分）

【解析】

试题分析：Ⅲ．将有毒物质加入细胞培养液后，培养的动物细胞会发生染色体数量和结构变异，在显微镜下可观察、统计这些变异，根据这些变异细胞占全部培养细胞的百分数（以下称Q值），可判断该化学物质的毒性。

Ⅳ（2）实验的自变量是化学物质甲或乙的有无，温度、细胞悬液的量、甲或乙物质的量等为无关变量。根据实验结果可判断A、B两个培养瓶中分别加入等量的化学物质甲、乙， C瓶不作处理，作为对照。

（3）②观察染色体可以用龙胆紫溶液染色。

（4）与小白鼠正常体细胞有丝分裂高倍显微镜照片进行对比，可以看出发生染色体变异的细胞。

Ⅵ．根据表中数据可以看出，A、B瓶中变异细胞比例高于C瓶，且B瓶中变异细胞比例最高，说明甲、乙两种化学物质均有一定毒性，且乙的毒性比甲的毒性大。

考点:本题主要考查动物细胞培养，考查实验的设计与分析能力。