Question

科研人员将绿色荧光蛋白（GTP）基因导入金鱼的受精卵中进行有关研究，请回答：

（1）上述过程中的GTP基因称为      ，该基因可由mRNA    形成．

（2）已知GTP基因的DNA两端分别有EcoR I、Sma I切割位点，切割下来的GTP基因含有      末端和      末端．

（3）质粒用EcoR I、Sma I切割之后，需用      将GTP基因与其连接形成重组质粒．

（4）GTP基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是      ，可采用      技术进行检测．

（5）构建重组质粒时，可用GTP代替抗氨苄青霉素基因作为      ．

（6）目前科学家们通过     工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程直接改造的是GFP分子,还是改造GFP基因? _____________。

Answer

（除特殊说明外每空1分，共15分）

（1）目的基因 反转录 （2）黏性 平（3）DNA连接酶

（4） 目的基因是否插入到受体细胞的DNA上（2分） DNA分子杂交

（5）标记基因 （6）蛋白质 GFP基因（2分）

【解析】（1）将绿色荧光蛋白（GTP）基因导入金鱼的受精卵中进行有关研究，说明GTP基因是目的基因；获取目的基因的方法有很2，可以通过mRNA反转录法四工合成。

（2）据题可知EcoR I、Sma I酶，它们分别可将目的基因切割，并产生黏性末端和平口末端。

（3）在构建基因表达载体时，需要DNA连接酶将目的基因和质粒中被限制酶切割的末端连接。

（4）GTP基因能否在受体细胞中稳定遗传的关键是目的基因是否插入到受体细胞的DNA上，可采用DNA分子杂交技术进行检测。

（5）构建重组质粒时，可用GTP代替抗氨苄青霉素基因作为标记基因，方便检测。

（6）科学家们通过蛋白质工程制造出了蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白等，该工程直接改造的是GFP基因。

【考点定位】基因工程的原理及技术

【名师点睛】1、目的基因：主要指编码蛋白质的结构基因，也可以是一些具有调控作用的因子．获得目的基因的方法：①从基因文库中获取 ②利用PCR技术扩增 ③人工合成（化学合成）。

2、限制性核酸内切酶主要是从原核生物中分离纯化出来的．其能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性．结果是经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

DNA连接酶连接的是两个核苷酸之间的磷酸二酯键．在构建基因表达载体时，DNA连接酶将目的基因和质粒重组。

2、将目的基因导入动物细胞的方法：显微注射技术．（最有效一种方法）．具体操作程序：目的基因表达载体提纯→取卵（受精卵）→显微注射→注射了目的基因的受精卵移植到雌性动物的子宫或输卵管内发育→新性状动物。