Question

【生物一选修1生物技术实践】自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般先要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：

A．制备稀释倍数为10²、10³、10⁴、10⁵、10⁶的系列稀释液。

B．在适宜温度下培养。

（1）为了得到更加准确的结果，你选用的接种方法是__________。

（2）测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是______。其理由是             。

A．一个平板，统计的菌落数是53

B．两个平板，统计的菌落数是62和76，取平均值69

C．三个平板，统计的菌落数分别是61、35和82，取平均值59

D．四个平板，统计的菌落数分别是21、42、61和55，取平均值45

（3）一同学在稀释倍数为10⁶的培养基中测得平板上菌落数的平均值为43．4，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0．2 mL）__________。

（4）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量________，因为____________。

（5）下表是某同学测定某土壤样品中自生固氮菌数量时配制的培养基配方。

培养基	NaNO3	K2HPO4	KCl	MgSO4	FeSO4	蔗糖	琼脂	蒸馏水
质量	2 g	1 g	0．5 g	0．5 g	0．01 g	30 g	15～20 g	1000 mL

有同学认为此培养基配方有误，请指出： _____________________。

Answer

（1）稀释涂布平板法

（2）C 在设计实验时，一般要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实

验的说服力与准确性；为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平

板计数。3分

（3）2．17×108

（4）多 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落

（5）培养基的配方中含有氮源是错误的，应将NaNO3改为不含N的钠盐

【解析】（1）欲实现微生物的计数，通常使用稀释涂布平板法对微生物进行接种。

（2）测定的大肠杆菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是三个平板，统计的菌落数分别是61、35和82，取平均值59。其理由是在设计实验时，一般要涂布至少三个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性；为了保证结果准确，一般选择菌落数在30-300的平板计数。

（3）一同学在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为43．4，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0．2 mL）43．4×106/ 0．2＝2．17×108。

（4）用这种方法测定密度，实际活菌数量要比测得的数量多，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落。

（5）此培养基的配方中含有氮源是错误的，应将NaNO3改为不含N的钠盐。

【考点定位】微生物实验室培养。