Question

【生物—选修3：现代生物科技专题】Rag₂基因缺失小鼠不能产生成熟的淋巴细胞。科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag₂基因缺失小鼠进行基因治疗。其技术流程如下图：

（1）步骤①中所选的卵母细胞应处于                期。

（2）步骤②中，重组胚胎培养到囊胚期时，可从其                分离出ES细胞，ES细胞在形态上表现为                的特点。

（3）步骤③中，需要构建含有Rag2基因的               。可以根据Rag2基因的核苷酸序列设计合成             ，利用               技术扩增Rag2基因片段。用HindⅢ和PstⅠ限制酶分别在目的基因所在DNA片段两侧进行酶切获得Rag2基因片段。为将该片段直接连接到表达载体，所选择的表达载体上应具有                 酶的酶切位点。

Answer

（1）减数第二次分裂中（MⅡ中）

（2）内细胞团 体积小、细胞核大、核仁明显

（3）表达载体（重组质粒） 引物 PCR Hind Ⅲ和PstⅠ

【解析】（1）步骤①为核移植，所选的卵母细胞应处于减数第二次分裂中（MⅡ中）。

（2）重组胚胎培养到囊胚期时，可从其内细胞团中分离出ES细胞，ES细胞在形态上表现为体积小、细胞核大、核仁明显。

（3）步骤③中表示将Rag2基因（目的基因）导入ES细胞（受体细胞），此过程需要构建含有Rag2基因的表达载体（重组质粒）。设计引物要遵循碱基互补配对原则，所以根据Rag2基因的核苷酸序列进行设计。可利用PCR技术扩增Rag2基因片段。Rag2基因片段是用HindⅢ和PstⅠ限制酶切割获得，所以表达载体上应具有HindⅢ和PstⅠ酶的酶切位点。

【考点定位】动物细胞工程、胚胎工程、基因工程

【名师点睛】本题以“科研人员利用胚胎干细胞（ES细胞）对Rag2基因缺失小鼠进行基因治疗的流程示意图”为情境，综合考查学生对动物细胞工程、胚胎工程、基因工程的相关知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解核移植的过程、胚胎干细胞的概念及囊胚的结构、基因工程的操作步骤的基础知识、形成清晰的知识网络，并且在平时的复习中要注意图文结合。