Question

图1为某种质粒简图，图2表示某外源DNA上的目的基因，小箭头所指分别为限制性核酸内切酶EcoRⅠ、BamHⅠ、Hind Ⅲ的酶切位点。下列有关叙述错误的是

A. 如果用EcoRⅠ对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种

B. 如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRⅠ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoRⅠ酶切点有1个

C. 为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理

D. 一个图1所示的质粒分子经EcoRⅠ切割后，含有2个游离的磷酸基团

Answer

B

【解析】A．如果用EcoRⅠ对外源DNA和质粒进行酶切，将多个含有目的基因的DNA片段与多个质粒的酶切产物用DNA连接酶进行连接后，两两连接所形成的产物有三种，A正确；B．如果将一个外源DNA分子和一个质粒分别用EcoRⅠ酶切后，再用DNA连接酶连接，形成一个含有目的基因的重组DNA，此重组DNA中EcoRⅠ酶切点有2个，B错误；C．为了防止质粒和含目的基因的外源DNA片段自身环化，酶切时应使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理，C正确；D．质粒切割前是双链环状DNA分子，所有磷酸基团参与形成磷酸二酯键，故不含游离的磷酸基团．从图1可以看出，质粒上只含有一个EcoRⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此图1所示的质粒分子切割后含有两个游离的磷酸基团，D正确。故选B。

【考点定位】基因工程的原理及技术．本题结合基因结构图和运载体结构图，考查基因工程的技术和原理，要求考生认真分析图1和图2，根据图1和图2中限制酶的给切割位点，明确构建基因表达载体能用2种限制酶组合，再运用所学的知识答题即可．

【名师点睛】从图1可以看出，质粒上只含有一个EcoRⅠ的切点，因此被改酶切割后，质粒变为线性双链DNA分子，因每条链上含有一个游离的磷酸基团，因此切割后含有两个游离的磷酸基团．由图2可知，标记基因和外源DNA目的基因中均含有EcoRⅠ酶切位点，都可以被EcoRⅠ破坏，故不能使用该酶剪切含有目的基因的DNA，只使用EcoR I，则质粒和目的基因两端的粘性末端相同，用连接酶连接时，会产生质粒和目的基因自身连接物，而利用BamHⅠ和HindⅢ剪切时，质粒和目的基因两端的粘性末端不同，用DNA连接酶连接时，不会产生自身连接产物．