Question

【加试题】回答下列（一）、（二）小题：

（一）炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。对炭疽病疑似患者，可通过甲图所示鉴定炭疽杆菌的实验进行确诊，其中实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌。

（1）若要从炭疽病疑似患者体内分离出炭疽杆菌，可将患者皮肤脓胞渗出物稀释后滴于培养基表面，用无菌玻璃刮刀涂匀，该接种方法称为____________。乙图所示的四种菌落分布图中，该接种方法不能得到的是_________________。

（2）制备甲图中的液体培养基时需采取______________法灭菌。接种可疑菌后，需将三角瓶置于35℃下的摇床上___________培养24小时，可疑菌会大量繁殖，液体培养基变浑浊。

（3）甲图中，对照组与实验组试管同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组________（高/低），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此判断的依据是______________。

（二）印度沙漠猫是一种珍稀猫科动物，通过胚胎工程技术，可以让家猫代孕而繁育，主要步骤如下图所示。

（1）步骤甲、乙分别是指    ___________、_______________。

（2）卵巢经超数排卵处理后，要使用超声监视器确定_______________的位置，插入穿刺针吸取其液体，取出_______________，在体外进行人工培养得到成熟的卵细胞。

（3）若在早期细胞培养过程中，发现某个细胞出现变异性状，科研人员提取这个细胞进行单独培养，此种培养方法称为___________。培养过程中,下列哪种细胞比较难以克隆？_____________

A.有限细胞系

B.无限细胞系

C.转化细胞系

D.肿瘤细胞系

Answer

涂布分离法D高压蒸汽灭菌震荡低噬菌体侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌数量下降体外受精或受精作用胚胎移植卵泡卵母细胞（或次级卵母细胞）克隆培养法或细胞克隆A

【解析】分析题图：(一）微生物实验室分离中配制培养基的操作步骤：计算→称量→溶解→调pH→灭菌步骤；(二）步骤甲为受精作用，步骤乙为胚胎移植，其中诱导超数排卵用的是促性腺激素，受精过程使用的培养液是获能溶液或专用受精溶液，早期胚胎培养的培养液成分，除了一些无机盐和有机盐类外，还需添加维生素、激素、氨基酸、核苷酸以及血清等。

(一）

(1)稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分布涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养．由图中四种菌落分布情况可知，A、B和C是采用稀释涂布平板法得到的，而D是采用平板划线法得到的。

(2) 制备图1中的液体培养基时应该用高压蒸汽灭菌 法进行灭菌，以杀死微生物及芽孢．接种可疑菌后，35℃培养24小时，细菌大量繁殖，液体培养基变浑浊。

(3) 对照组试管中应加入等量生理盐水，与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。此实验依据的原理是实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清。

(二）

(1) 步骤甲为受精作用，步骤乙为胚胎移植；

(2) 卵巢经超数排卵处理后，要使用超声监视器确定卵泡的位置，插入穿刺针吸取其液体，取出卵母细胞（或次级卵母细胞）。

(3) 提取这个细胞进行单独培养，此种培养方法称为克隆培养法或细胞克隆。有限细胞系由于增殖能力有限（10-50代），转化细胞具有较强的适应能力，容易克隆。