Question

为了调查邯郸市自来水水源地的水质情况，某研究小组对该地自来水水样中的大肠杆菌进行了测定，请回答下列问题：

（1）该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌，划线时在培养基上共画了4个区域，则需要_______次灼烧接种环．在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线，这样做的目的是___________。

（2）如果是用试管培养微生物，在培养基凝固前要搁置斜面，其目的是__________．接种时需在酒精灯火焰旁操作的原因是：_______________。

（3）检测自来水中大肠杆菌，可选用伊红美蓝培养基，伊红美蓝培养基从功能上属于_____培养基，若其中加入蛋白胨，蛋白胨能提供的主要营养有______________。该研究小组在统计菌落数目时，为防止因培养时间不足而遗漏菌落数，应培养至___________________时，再计数。

Answer

5 将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面 增加了培养表面积 为避免周围环境中微生物的污染 鉴别 碳源、氮源和维生素 菌落数目稳定（必须说出数目，菌落稳定不给分）

【解析】（1）该小组采用平板划线法分离提纯水样中的细菌，划线时在培养基上共画了4个区域，则需要5次灼烧接种环，因为除每次划线前要灼烧灭菌外，划线结束后也要灼烧灭菌。为了将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在第二次及以后划线时，总是从上一次的末端开始划线。

（2）为了增加了培养表面积，试管中的培养基在凝固前要搁置斜面，增大培养基的表面积。接种时需在酒精灯火焰旁操作的原因是避免周围环境中微生物的污染。

（3）在培养基中加伊红美蓝，是为了鉴别大肠杆菌，所以伊红美蓝培养基从功能上属于鉴别培养基。在培养基中加入蛋白胨，由于蛋白胨中含有氮元素、碳元素和某些微生物不能合成的氨基酸，所以加入蛋白胨能给培养的微生物提供的主要营养有碳源、氮源和生长因子。为防止因培养时间不足而遗漏菌落数，应培养至菌落数目稳定时，再计数。

【点睛】总结平板划线法分离纯化菌种的注意事项：

(1)接种环的灼烧

①第一次划线前：杀死接种环上的微生物，避免污染培养物；

②每次划线前：杀死残留菌种，保证每次划线菌种来自上次划线末端；

③划线结束后：杀死残留菌种，避免污染环境和感染操作者。

(2)灼烧接种环之后，要冷却后再进行操作，以免温度太高杀死菌种。

(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。

(4)划线用力要大小适当,防止用力过大将培养基划破。