Question

2016年5月13日，美国国家卫生院科学家发表报告，他们在艾滋病病毒上发现一种由8个氨基酸组成的融合肽，它是病毒入侵细胞的关键性物质。这一发现为艾滋病的预防和治疗开辟了一条新途径。

欲将融合肽设计为疫苗进行免疫预防，可能需要改造其部分结构。

①一般流程是：预期新型融合肽的功能→设计新型融合肽结构→推测________________→找到对应的脱氧核苷酸序列。然后用___________（答一种仪器）合成出目的基因。要获得大量的目的基因，需要用___________扩增。该技术的前提是要有______________序列，以便根据这一序列合成引物。

②欲用牛乳腺生物反应器大量生产新型融合肽，在构建基因表达载体时，需要加入____________启动子，通常选用______________作为受体细胞。

欲大量生产融合肽抗体用于免疫治疗，可将融合肽反复多次注入小鼠体内，从小鼠脾脏提取_________细胞，将其与小鼠骨髓瘤细胞融合，并在特定的培养基上筛选出杂交瘤细胞，再通过_________，筛选出能产生融合肽抗体的杂交瘤细胞，在小鼠腹水或体外扩大培养，获得大量融合肽抗体。

Answer

应有氨基酸序列 DNA合成仪 PCR 一段已知目的基因的核苷酸 牛乳腺蛋白基因 受精卵 B（B淋巴） （多次）克隆化培养和（专一）抗体（阳性）检测

【解析】分析：蛋白质工程的一般流程是：预期合成的新蛋白质的功能→设计新蛋白质的结构→推测新蛋白质应有的氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列→合成目的基因→导入目的基因到受体细胞→得到预期的蛋白质。为了得到大量的目的基因，需要PCR技术扩增，该技术完成特别需要一段已知序列的引物，另外还需要具有热稳定的DNA聚合酶和相关的原料。为了获得大量的转基因产物，一是培育大量转基因的牛乳腺生物反应器，二是应用单克隆抗体制备技术实现。

根据蛋白质工程的一般流程分析可知：预期新型融合肽的功能→设计新型融合肽结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列。如果目的基因中核苷酸序列已知且数量较少，可以用DNA合成仪合成出目的基因。要获得大量的目的基因，需要用PCR技术扩增。该技术的前提是要有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。

为了在转基因牛的乳汁中提取到新型融合肽，需要将新合成的目的基因之前加入牛乳腺蛋白基因的启动子，确保新型融合肽在乳腺细胞内表达并随乳汁分泌出来。这一过程的受体细胞通常选受精卵。

欲大量生产融合肽抗体用于免疫治疗，可将融合肽反复多次注入小鼠体内，从小鼠脾脏提取B淋巴细胞，将其与小鼠骨髓瘤细胞融合，并在特定的培养基上筛选出杂交瘤细胞，再通过多次克隆化培养和专一抗体阳性检测，筛选出能产生融合肽抗体的杂交瘤细胞，在小鼠腹水或体外扩大培养，获得大量融合肽抗体。

【点睛】本题是基因工程、蛋白质工程和动物单克隆抗体制备技术的综合应用，特别需要学生对蛋白质工程的流程、转基因动物的培育流程和单克隆抗体制备流程熟悉才能准确作答。