Question

下图1为某种常用质粒的序列图，Lac Z基因编码的酶能使无色的X—gal变为蓝色，Amp^r为氨苄青霉素抗性基因。图2为目的基因的序列及其相关限制酶的识别序列。请回答下列问题：

（1）若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有________，构建重组质粒时需要的工具酶有_______________，对获取的目的基因可用____________技术对其扩增。 

（2）实验小组用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒后导入大肠杆菌中，在筛选重组质粒的培养基上，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了_____________。没有导入任何外源DNA的大肠杆菌_____________（填“能”或“不能”）在该培养基上生存。 

（3）若质粒和目的基因用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后，用DNA连接酶相连，然后再用BamH I和EcoR I切割成功连接后的重组质粒，可获得长度不同的_____________种DNA片段。（假定每一种限制酶都充分切割。）

Answer

X—gal 氨苄青霉素 限制酶、DNA连接酶 没有目的基因的空质粒 不能 2

【解析】【试题分析】

1.据图分析可知，该实验应该用用BamH I和Bgl II两种限制酶切割目的基因和质粒，构建重组质粒。这样，重组质粒上的Lac Z基因即被破坏，而不能合成能使无色的X—gal变为蓝色的酶，故导入了目的基因的重组质粒，培养基上的无色物质X—gal就不会变色。另外，质粒上的氨苄青霉素抗性基因Ampr，可作为标记基因，用于鉴别和筛选重组质粒。

2. 根据图2相关限制酶的识别序列可知，BamH I和Bgl II两种限制酶的识别序列不同，所以都不能在对方的切割位点进行切割。

（1）根据题意和上面分析可知，若要筛选成功导入目的基因的重组质粒，培养基中应加入的物质有X—gal和氨苄青霉素；构建重组质粒时需要的工具酶有限制酶、DNA连接酶。

（2）由上面分析可知，若大肠杆菌菌落显蓝色，说明导入了导入大肠杆菌的质粒上含有Lac Z基因，能合成使培养基中无色的X—gal变为蓝色的酶，即说明导入了没有目的基因的空质粒；没有导入任何外源DNA的大肠杆菌内没有氨苄青霉素抗性基因Ampr，不能在含有氨苄青霉素的培养基上生存。

（3）根据图2相关限制酶的识别序列和题意可知，用BamH I和Bgl II两种限制酶切割后形成的重组质粒再用BamH I和EcoR I切割时，只能在这两种限制酶识别和切割位点上进行切割，故可获得长度不同的2种DNA片段。