Question

[生物——选修1：生物技术实践]乙醇是目前世界上生产规模最大的生物能源，由于石油面临枯竭，可再生的乙醇作为可替代石油的新能源已成为全球关注的焦点。科研工作者研制出利用微生物降解秸秆生产乙醇的技术，大致流程如下图所示。

（1）若要从土壤中分离出能降解植物秸秆的微生物，培养基中的碳源是____，对该培养基可采取______的方法进行灭菌。

（2）某小组对分离得到的微生物培养液进行数量测定，在稀释倍数为10⁵对应的培养基中测定平板上菌落数的平均值为234，则每毫升样品中的细菌数是（涂布平板时稀释液的体积为0.2mL）______个。

（3）用上述方法测定目的菌的密度，实际活菌数量要比测得的菌落数量多，原因是_________。

（4）上述流程图中，糖液发酵产生乙醇需要的菌种是_____，乙醇是在目的菌的______（结构）中产生的。

Answer

纤维素 高压蒸汽灭菌 1.17×108 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是一个菌落 酵母菌 细胞质基质

【解析】分析：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。若要对微生物进行取样计数，接种方法只能是稀释涂布平板法。稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。

（1）若要从土壤中分离出能降解植物秸秆的微生物，培养基中的碳源应该选植物秸秆中含有的大量成分——纤维素作为唯一碳源。对培养基灭菌常采用高压蒸汽灭菌法。

（2）在稀释倍数为106的培养基中测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品（涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL） 中的菌落数是=105×234÷0.2=1.17×108个。

（3）由于当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察的是一个菌落，因此用这种方法测定得密度偏低。

（4）糖液发酵产生乙醇需要的酵母菌进行无氧呼吸产生，其中乙醇是在酵母菌无氧呼吸在细胞质基质中产生。

【点睛】注意间接计数法(活菌计数法)测定微生物数量的计算公式：

每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，其中A为测定的平均菌落数，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。