Question

B淋巴细胞瘤是一种恶性肿瘤，用常规手段治疗时，会损伤大量的正常组织细胞，因此探索高效的治疗手段已成为肿瘤治疗领域需要迫切解决的热点问题。

（1）B淋巴细胞瘤产生的根本原因是_______________________。正常机体通过特异性免疫中的____________ 免疫对肿瘤细胞发挥着免疫监控和清除的作用，但由于各种原因，导致肿瘤细胞表面抗原表达量____________，无法被识别，从而成功躲避攻击而快速增殖。

（2）实验证实，CD19是B淋巴细胞瘤中特异性表达的一种抗原，在少数正常细胞，如B细胞、浆细胞中也有少量表达；CD28、CD137可激活Ｔ细胞，使其恢复增殖和抗肿瘤能力。科研人员利用____________技术获得的CD19单克隆抗体，与CD28、CD137组成嵌合抗原受体（CAR），结构如图。请预测CAR在免疫应答中的优势：____________。

（3）利用___________ 酶将控制CD19单抗、CD28、CD137等合成的相关基因构建成嵌合基因，并与作为____________的病毒结合，导入到T细胞并整合到____________上，检测到目的（嵌合）基因表达后，培养并获得大量的嵌合抗原受体T细胞（CAR-T）。

（4）对CAR-T的抗肿瘤效果进行检测。

①选取裸鼠的原因是____________。

②B组注射适量的_______________，D组注射等量____________。

③实验证实CAR-T细胞对小鼠体内的肿瘤生长有明显抑制作用，实验结果应为________。

（5）你认为将CAR-T用于人类肿瘤治疗，可能存在的风险是____________。

Answer

原癌基因与抑癌基因突变 细胞 减少 动物细胞融合 既可识别并结合肿瘤抗原又能激活T细胞，使其具有增殖和抗肿瘤能力 DNA连接 载体 细胞核中的DNA（染色体DNA） 裸鼠无胸腺，缺少T细胞，避免排异反应对实验干扰；避免自身T细胞杀伤肿瘤细胞 含有正常T细胞的PBS 含有CAR-T的PBS D组肿瘤体积明显小于A、B、C组（或肿瘤体积D﹤C≈B﹤A） CAR-T对某些正常组织（B细胞或浆细胞）表达的抗原进行免疫应答、载体插入到正常基因组中引起变异

【解析】试题分析：癌细胞突变的根本原因是原癌基因与抑癌基因突变，免疫系统具有监控、防卫和清除的功能，据此回答。

（1）细胞癌变是原癌基因和抑癌基因突变导致的，第一空填基因突变。人体在清除癌细胞

时依赖细胞免疫。效应 T 细胞无法识别肿瘤细胞，说明肿瘤细胞膜表面抗原减少。

（2）在制备单克隆抗体时，通常需要使用动物细胞培养和动物细胞融合技术。

A 区含 CD19 单抗，可特异性结合 B 淋巴细胞瘤表面的抗原 CD19，B 区含 CD28、CD137，可激活 T 细胞；所以该嵌合体抗原受体 CAR 的优势是既能通过结合 CD19 特异性识别 B 淋巴细胞瘤，又能激活 T 细胞产生效应 T 细胞，增强了效应 T 细胞定向杀伤 B 淋巴细胞瘤的能力。

（3）构建嵌合基因需要将 CD19 单抗基因和 CD28 基因、CD137 基因整合在一起，所以需要限制酶切割，又需要 DNA 连接酶连接。目的基因导入到受体细胞时需要运载体，此处选择的运载体是动物病毒。由于目的基因导入后需要能在受体细胞稳定存在并表达，所以需要让目的基因整合到细胞本身的染色体 DNA 上，其实质粒也可以保证稳定存在并表达，但此处并没有用质粒作运载体。

（4）①由于要检测 CAR-T（嵌合抗原受体 T 细胞）的效果，最好没有其他 T 细胞的干扰，而裸鼠体内不能产生 T 细胞，所以选取裸鼠的原因就是为了排除鼠自身 T 细胞对实验结果的影响。

②由于要检测 CAR-T 的效果，D 组（实验组）中就应注射等量含 CAR-T 的 PBS。实验中 C 组的 T 细胞中转入了空载体，D 组 T 细胞中转入了连有嵌合基因的载体，那么在逻辑上要确认实验结果是由嵌合基因表达产物造成的，还需要排除导入载体的过程对实验结果的影响，所以 B 组就应该注射等量的未转入载体的正常 T 细胞的PBS。

③要得到“CAR-T 对小鼠体内的肿瘤生长有明显抑制作用”的结论，那么预期的实验结果就是 D 组裸鼠的肿瘤体积最小。

（5）由于 CD19 抗原在少数正常细胞，如 B 细胞、浆细胞中也有少量表达，所以在使用 CAR-T 治疗时，也有可能杀伤正常 B 细胞、浆细胞，导致体液免疫能力减弱。