Question

(一）为从养猪场周围土壤中分离产脲酶的微生物，进行了如下实验。

（1）培养基的制备：本实验需在LB固体培养基和尿素固体培养基上进行接种，因尿素_____________，只能用_____________过滤。下列对本实验选用的尿素固体培养基和LB固体培养基的叙述，错误的是（____）

A.都要进行高压蒸汽灭菌   B.都含有N源   C.都要添加琼脂糖   D.都要添加酚红指示剂

（2）制备细菌悬液：在无菌条件下，将土样加到含有适量____________的三角瓶中，振荡摇匀，并以此方法制备不同浓度的土壤稀释液。

（3）接种：本实验采用的接种方法是____________。

(二）某研究小组利用下图所示的现代生物科学技术生产药用蛋白一一人组织纤溶酶原激活物（htPA)。请回答：

（1）构建重组表达载体时，通常用_____________切割htPA基因与载体，形成________，再通过DNA连接酶连接。

（2）为获取更多的实验用受精卵，要对供卵母羊注射相应激素，使其________________，获得较多的卵母细胞。采集的精子需要经过________________处理，才具备受精能力。

（3）若想获得更多转htPA基因母羊，还可以对含有htPA基因的胚胎进行________________。    然后再通过________________技术可获得较多后代。

（4）下列有关基因工程的叙述，正确的是（____）

A.载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达

B.大肠杆菌质粒是基因工程最常用的载体

C.若目的基因的序列是未知的，可选用PCR技术扩增目的基因

D.DNA连接酶催化形成氢键和磷酸二酯键的形成

Answer

加热会分解 G6玻璃砂漏斗 D 无菌水 涂布法（或涂布分离法） 相同限制性核酸内切 相同的粘性末端 超数排卵 获能 胚胎分割 胚胎移植 B

【解析】试题分析：从土壤中分离目的微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术；个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

(一）（1）尿素加热会分解，所以实验过程中只能用G6玻璃砂漏斗进行过滤。尿素固体培养基和LB固体培养基都含有N元素，一般都用高压蒸汽灭菌法进行灭菌，且都需要进入琼脂以使得培养基成为固态；后者需要加入酚红指示剂，但是前者不需要。

（2）为了防止杂菌污染，在无菌条件下，将土样加到含有适量无菌水的三角瓶中，振荡摇匀，并以此方法制备不同浓度的土壤稀释液。

（3）据图可知，该实验的接种方法为稀释涂布平板法。

(二）（1）在基因工程中，构建基因表达载体时，把目的基因与运载体一般用同种限制酶进行切割，再用DNA连接酶连接，以构建基因表达载体。

（2）超数排卵处理时，需要注射促性腺激素；采集的精子必须经过获能处理后才具备受精能力。

（3）早期胚胎细胞具有全能性，可利用胚胎分割和胚胎移植技术获得多个转基因个体。

（4）载体上的抗性基因是可用于筛选含重组DNA的细胞，但不能促进目的基因的表达，A错误；大肠杆菌质粒是基因工程最常用的载体，B正确；利用PCR技术扩增目的基因的前提，是要有“一段已经目的基因的核苷酸序列”，C错误；DNA连接酶催化形成磷酸二酯键的形成，D错误。

【点睛】本题结合土壤中分离产脲酶的微生物图、转htPA基因母羊的培育过程图，考查微生物的分离和培养、基因工程的相关知识，要求考生识记微生物培养的过程、实验的原理；基因工程的原理、操作工具及操作步骤，掌握各步骤中的相关细节，能结合所学的知识准确答题，属于考纲识记和理解层次的考查。