Question

某些细菌可分解有机磷农药水胺硫磷,水胺硫磷的喷洒使土壤受到污染。某同学欲从受农药污染的土壤中筛选出高效降解有机磷农药的菌株。请回答下列问题：

（1）在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_____为唯一碳源的培养基上。从用途上划分，该培养基属于______培养基。

（2）若要测定稀释液中的菌体数可在显微镜下用______直接计数。若要测定其活菌数量，可选用_______法进行计数，使用该计数方法时研究人员分布在6个培养基平板上接种稀释倍数为10⁴的稀释液各0.1mL，培养一段时间后，平板上长出菌落数分别为19、130、166、400、188、116，则每克样品中的活菌数为______个。

（3）为了筛选出高效菌落，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌落的降解能力_________。

（4）下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述,其中错误的是（______）

A.要准确检测总菌数可采用显微镜直接计数法

B.取10⁴、10⁵、10⁶倍的土壤稀释液和无菌水各0.lmL,分别涂布于各组平板上

C.运用显微镜直接计数法进行计数时也要进行适当的稀释

D.确定对照组无菌后,选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数

Answer

水胺硫磷 选择 血球计数板 稀释涂布平板 1.5×107 强 D

【解析】（1）要想筛选可分解有机磷农药水胺硫磷的细菌，在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以水胺硫磷为唯一碳源的培养基上。从用途上划分，该培养基属于选择培养基。

（2）若要测定稀释液中的菌体数可在显微镜下用血球计数板直接计数。若要测定其活菌数量，可选用稀释涂布平板法进行计数。根据题意，6个培养基平板上长出菌落数分别为19、130、166、400、188、116，应除去其中两个太少和过多的平板，再计算平均菌落数为（130+166+188+116）/4=150个，再根据接种稀释倍数和稀释液量，培养一段时间后，平板上则每克样品中的活菌数为150÷0.1×104 =1.5×107个。

（3）单个菌落周围分解圈越大，代表分解原油的能力越强。

（4）要准确检测土壤中细菌总数，可采用显微镜直接计数法，A正确；通过用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48小时，在确定对照组无菌后，选择菌落数在30～300的一组平板为代表进行计数，所以B、C正确，D错误。

【点睛】总结测定微生物数量的常用方法：

(1)显微镜直接计数法

①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板,在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。

②方法：用血球计数板计数。

③缺点：不能区分死菌与活菌。

(2)间接计数法(活菌计数法)

①原理：当样品的稀释度足够高时,培养基表面生长的一个菌落,来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数,就能推测出样品中大约含有多少活菌。

②计算公式：每克样品中的菌株数=(C÷V)×M，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。

③操作：设置重复组，增强实验的说服力与准确性。同时为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。