Question

科学研究表明，氮素是水和土壤中重要的污染因子，氮肥经土壤微生物分解后产生的氨对雾霾的贡献率达20%以上，农业污染逐渐引起科学界和政府的重视。为研究土壤微生物对氮素的分解作用，某研究人员分别对所取土样进行分解尿素的细菌的分离纯化操作（A组）和土壤微生物计数操作(B组），过程如下图一，序号①〜⑨表示实验步骤。

（1)步骤①所用的小铁铲需采用________法进行灭菌处理，称取土样时通常需在______旁进行。

（2）分析步骤③、④所用的培养基的成分，最大的区别是________(成分)种类不同。

（3）对分离出的细菌进行长期保存，常采用的方法是____________。

（4）图二所示的接种方法可以在图一的步骤________（填序号）中采用，甲、乙、丙为划线的三个区域，为正确完成接种过程，接种环至少进行________次灼烧灭菌。

（5）步骤⑦中，对1mL菌液进行系列稀释10、100、1000倍，分别经过步骤⑧的接种和培养后，观察到菌落的平均数依次为2860、257、23，则可推测适宜的土样稀释倍数为1000倍，原因是____________。

Answer

干热灭菌 火焰（或酒精灯火焰） 氮源 甘油管藏法 ⑤ 4 步骤⑦的稀释倍数为100倍时形成的菌落平均数在30〜300之间，步骤②已稀释了10倍，共稀释了1000倍

【解析】试题分析：本题考查微生物的分离、计数，考查对无菌技术、保藏技术、分离技术、计数方法的理解与应用。

（1)取样用的小铁铲等金属用具可采用干热灭菌法进行灭菌，称取土样时通常需在火焰（或酒精灯火焰）旁进行，以避免其他杂菌污染。

（2）④所用的培养基为选择培养基，应以尿素为唯一氮源。

（3）对细菌进行长期保存，常采用甘油管藏法。

（4）图二表示平板划线法，可以在图一的步骤⑤分离时采用，甲、乙、丙为划线的三个区域，每次划线前和划线后均应进行灼烧灭菌，接种环至少进行4次灼烧灭菌。

（5）步骤⑦的稀释倍数为100倍时形成的菌落平均数为257，在30〜300之间，适于进行分离、计数，步骤②已稀释了10倍，则共稀释了1000倍。