Question

回答下列(一)、（二）小题：

(一）脲酶是催化尿素分解的特异性水解酶。该酶主要从刀豆等豆科植物提取，现被广泛应用于尿素废水的净化过程。请分析回答以下问题：

(1)脲酶可以催化尿素分解为_______，其中碱性物质可以使酚红指示剂变为______________。

(2)为了提高脲酶的利用效率，可以釆用固定化酶技术将其固定。酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和___________________。

(3)实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是___________________________。

(4)脲酶除了从植物获取外，还可以来源于土壤中的微生物。为了从土壤中分离以尿素为氮源的微生物,采用的分离方法操作最简便的是_____________。下列有关该分离方法的操作叙述错误的是____________。

A.必须使用固体培养基                                

B.必须在酒精灯火焰旁接种

C.必须将接种后的培养皿倒置培养

D.必须将接种前的培养皿、培养基、土壤悬浮液等进行灭菌处理

(二）人血淸蛋白（HSA)具有重要的医用价值。下图是以基因工程技术获取重组HSA（rHSA）的两条途径。

(1)如果HSA基因序列未知，可以采用____________的方法获取该目的基因，为了使目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存，通常要先构建_____________后才能导入宿主细胞。

(2)方框中的“？”一般选用的生物是________,为了提高II过程的导入成功率，通常用________处理大肠杆菌。

(3)人体合成的初始HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性，所以，选择_____途径（填I或II)获取rHSA更有优势。

(4)为了鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用_____________方法来进行检验。

A.检验HSA莛因是否导入               B.检验细胞中是否产生相应的mRNA

C.抗原、抗体杂交                     D.检测是否有标记基因

Answer

NH3和CO2 红色 交联法 除去未吸附的游离脲酶 划线分离法 D 从基因文库中提取 重组DNA 农杆菌 氯化钙 I C

【解析】试题分析：本题考查微生物的分离、酶的固定化技术和基因工程，考查对分离以尿素为氮源的微生物的原理、操作过程的理解和识记，考查考查酶的固定化方法的识记，考查对基因工程操作程序的理解和识记。

(一） (1)脲酶可以催化尿素分解为NH3和CO2 ，其中碱性物质可以使酚红指示剂变为红色。

(2)酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和交联法。

(3)用吸附法将脲酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是除去未吸附的游离脲酶。

(4)从土壤中分离以尿素为氮源的微生物,最简便的分离方法操作是划线分离法。分离微生物必须使用固体培养基，应在酒精灯火焰旁接种，应将接种后的培养皿倒置培养，必须将接种前的培养皿、培养基等进行灭菌处理，土壤悬浮液不能做灭菌处理。

(二）(1)如果HSA基因序列未知，可以从基因文库中提取该目的基因，为了使目的基因能够在宿主细胞中复制和稳定保存，通常要先构建重组DNA后才能导入宿主细胞。

(2)培育转基因植物常用农杆菌转化法，用氯化钙处理大肠杆菌，可以提高转化大肠杆菌的成功率。

（3）大肠杆菌为原核生物，细胞内没有膜系统，选择I途径更有优势。

(4)鉴定宿主细胞中是否产生rHSA,可以用抗原—抗体杂交方法进行检验。