Question

【生物一选修3:现代生物科技专题】某质粒上有SalⅠ、HindⅢ、BamHⅠ三种限制酶切割位点，同时还含有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。利用此质粒获得转基因抗盐烟草的过程如图所示，请回答下列问题。

（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是________________。

（2）在构建重组质粒时，应选用__________和__________两种酶对目的基因和质粒进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）将目的基因导入植物细胞采用最多的方法是农杆菌转化法。含有目的基因的农杆菌可根据标记基因进行筛选。若农杆菌在含有氨苄青霉素和四环素的培养基上都可以生长繁殖，农杆菌中是否己含有目的基因？

__________(是/否)。为什么？_________________________________________________。

（4）愈伤组织经__________形成完整植株，这一过程需要再转接到___________培养基上进行培养，该过程的实质是__________________。

Answer

抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上 HindⅢ SalⅠ 否 含有目的基因的质粒抗四环素的基因被破坏 再分化 分化 基因的选择性表达

【解析】试题分析：本题结合转基因抗盐烟草的培育过程图，考查基因工程、植物组织培养等知识，要求考生识记基因工程的原理、工具及操作步骤，能根据图中限制酶的位置及题干要求选择正确的限制酶；掌握目的基因检测和鉴定的方法等。

（1）抗盐某因是否在烟草细胞中稳定遗传的关键是抗盐基因（目的基因）是否插入到烟草的染色体DNA上。

（2）只有SalⅠ酶切割含有目的基因的DNA与质粒，形成相同的黏性末端，容易发生自身连接和反向接入；HindⅢ会破坏目的基因；则在构建重组质粒时，应选用SalⅠ、HindⅢ两种酶对质粒和含抗盐基因的DNA进行切割，以保证重组DNA序列的唯一性。

（3）选用SalI、HindIII两种酶对质粒进行切割时，形成的重组质粒中含抗氨苄青霉基因而抗四环素基因被破坏，故农杆菌中没有含有目的基因，为筛选出导入了重组质粒的农杆菌，应在培养基中加入氨苄青霉素。

（4）愈伤组织经再分化，形成完整植株，这一过程需要再转接到分化培养基上进行培养，细胞分化的实质是选择性表达。

点睛：基因工程中目的基因的检测和表达方法： ①首先要检测转基因生物的染色体DNA上是否插入了目的基因，方法是采用 DNA分子杂交技术；②其次还要检测目的基因是否转录出了mRNA，方法是采用用标记的目的基因作探针与 mRNA杂交；③最后检测目的基因是否翻译成蛋白质，方法是从转基因生物中提取蛋白质，用相应的抗体进行抗原-抗体杂交；④有时还需进行个体生物学水平的鉴定；如转基因抗虫植物是否出现抗虫性状。