Question

为获取可降解高盐度工业废水中有机物的耐盐菌，研究人员进行了如下实验：

①制备含3% NaCl的固体培养基，以及含3%、5%和7% NaCl以高盐度工业废水中有机物为碳源的液体培养基；

②将高盐度废水采用平板划线法接种只含3% NaCl的固体培养基，如图一。然后置于适宜条件下培养一段时间，观察形成的菌落特征；

③将分离纯化后的菌株接种到固体斜面培养基上，适宜条件下培养适当时间，将试管置于4℃冰箱中保藏待用；

④取固体斜面上的菌株制成菌液，取等量菌液，分别加入到步骤①中制备的3组液体培养基中摇床培养35小时，定时取样统计活菌数目。测定结果如图二所示。

回答下列问题：

(1)配制培养基时，灭菌、添加NaCl溶液和调节pH的先后顺序是_________________。

(2)步骤②平板划线操作过程中，第一次划线前灼烧接种环的目的是防止杂菌污染，第二次及之后的几次划线前灼烧接种环的目的是_____________________________________。完成图一所示操作，至少需要灼烧接种环___________次。 

(3)步骤④中常采用 _______________法统计活菌数目。直接从静置的培养液中取样计数的做法是错误的，正确的操作是________________。若每种浓度设3个重复实验，每次统计活菌数目时，需要从 ___________个培养基中取样。

(4)由图二可知，该耐盐菌最适合处理含__________（浓度）NaCl的废水。用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时，需要 _________________（合理措施），才能达到理想效果。

Answer

添加NaCI溶液、调节pH、灭菌 杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端） 6 稀释涂布平板法 将培养液摇匀后取样计数 9 3% 适当延长处理时间（增大接种量）

【解析】试题分析：微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。实验室常用的灭菌方法：①灼烧灭菌：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他金属工具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌，此外，在接种过程中，试管口或瓶口等容易被污染的部位，也可以通过火焰燃烧来灭菌；②干热灭菌：能耐高温的，需要保持干燥的物品，如玻璃器皿（吸管、培养皿）和金属用具等，可以采用这种方法灭菌；③高压蒸汽灭菌：将灭菌物品放置在盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，为达到良好的灭菌效果，一般在压力为100 kPa，温度为121℃的条件下，维持15～30 min。

（1）配制培养基的顺序为：添加NaCl溶液、调节pH、灭菌。

（2）平板划线操作过程中，每一次第二次及之后的几次划线前都要灼烧接种环，以杀死上次划线后接种环上残留的菌种（使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端）。每次接种前后都要对接种环进行灼烧灭菌，图一中一共划线5次，所以需要灼烧接种环6次。

（3）常用的接种方法有稀释涂布平板法和平板划线法，其中稀释涂布平板法可以用活菌的计数。从静置的培养液中取样计数时，必须将培养液摇匀后取样计数。已知培养液有3个浓度，若每个浓度设计三个重复实验，则共需要设计9组实验，即每次统计活菌数目时，需要从9个培养瓶中取样。

（4）由图二可知，该耐盐菌最适合处理含3%NaCl的废水。用该耐盐菌处理较高盐度工业废水时，需要适当延长处理时间，才能达到理想效果。

【点睛】本题的知识点是平板划线操作划线前后的灭菌及目的，平板划线法接种的结果预期，主要考查学生对平板划线法的掌握程度。