Question

[生物一选修1:生物技术实践]

某小组开展“市售鲜猪肉中大肠杆菌的分离鉴定及耐药性分析”的研究，进行了相关实验操作，回答下列问题：

（1）菌株的分离纯化:切取鲜猪肉表层样品接入蛋白胨大豆肉汤培养基中，放在37℃摇床振荡培养18h。取肉汤接种于琼脂平板培养基上，培养后再挑取单菌落，接种培养，培养一段时间后，再次挑取单菌落接种于固体培养基上，多次重复此步骤。菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的______________；操作过程中液体培养的目的是______________，反复接种固体培养基的目的是____________________________。

（2）下面是纸片扩散法对猪大肠杆菌的耐药性实验。

步骤1:用打孔器制成直径约6 mm的圆形滤纸片，浸入一定浓度的氨苄西林，烘干；

步骤2:取含大肠杆菌的菌液均匀涂布于______________上；

步骤3：在培养基上，每隔一定距离贴一片含药物的圆形滤纸片，培养，观察。

分析与评价：

①观察发现，在每个纸片周围都形成了抑菌圈，其直径的大小表示大肠杆菌对氨苄西林的敏感性。抑菌圈直径越大，敏感性越______________（填“高”或“低”）。

②发现在抑菌圈外长满多种不同形态的菌落，其原因可能是_________________________。

③欲比较五倍子和黄连提取液对猪大肠杆菌的抑制作用，为治疗提供依据。请写出实验思路:________。

Answer

子细胞群体 获得含有大肠杆菌等菌的菌液 分离纯化菌落 平板培养基 高 操作过程污染了其他微生物 取等量相同浓度的五倍子后黄连提取液，采用纸片扩散法，比较抑菌圈的直径大小，直径越大，抑制作用越强

【解析】（1）菌落是指由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体。根据题意，操作过程中液体培养的目的是为了获得含大肠杆菌的菌液。反复接种固体培养基的目的是不断的分离纯化菌落。

（2）①用“纸片扩散法”检测猪大肠杆菌的耐药性的具体操作就是将药物浸入滤纸片，再将滤纸片贴在含大肠杆菌的平板培养基上，观察滤纸片周围形成的抑菌圈直径大小，直径越大说明药物对细菌抑制作用越强，换句话说，细菌对该药物的敏感性越高。②如果在抑菌圈外长满多种不同形态的菌落，说明存在不同种类的细菌，其可能的原因是操作过程污染了其他杂菌。③欲比较五倍子和黄连提取液对猪大肠杆菌的抑制作用，实验思路要注意遵循实验设计的等量性原则，所以应取等量相同浓度的五倍子和黄连提取液，采用纸片扩散法，比较抑菌圈的直径大小，直径越大，抑制作用越强。

【点睛】本题关键要明确“纸片扩散法”检测猪大肠杆菌的耐药性的原理：将浸有药物的滤纸片贴在含某细菌的平板培养基上，观察抑菌圈的直径大小。