Question

[生物一选修1:生物技术实践]

炭疽杆菌能引起人畜患炭疽病。炭疽杆菌两端截平、呈竹节状排列，菌落呈卷发状。对炭疽病疑似患者，可根据噬菌体的寄主专一性，通过实验进行确诊。

细菌培养：采集疑似患者的样本，分离培养，获得可疑菌落。

细菌鉴定：实验流程图如下图所示。

（1）对配制的液体培养基要采用___________方法灭菌。培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是_______________________。

（2）挑选可疑菌后进行接种时，放在35℃条件下培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是__________。图中的对照组试管中应加入____________________。

（3）图中两组试管同时培养6小时后，进行比较，若实验组液体培养基的浑浊度___________(填“提高”、“降低”、“不变”），则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染。此实验依据的原理是___________。

（4）在对微生物进行扩大培养过程中需要对微生物进行计数。取0.2mL样品，用固体培养基对其培养，最后统计三个平板，菌落数分别是200、180、220。则样品中微生物的数量为_____________个/mL。该统计结果_________(填“低于”、“髙于”)实际值。

Answer

髙压蒸汽 先调节pH,后灭菌 细菌大量繁殖 等量生理盐水 降低 实验组中的噬菌体能特异性地侵染炭疽杆菌，使细菌死亡，溶液变澄清 1000 低于

【解析】试题分析：培养基的基本成分：水、无机盐、碳源、氮源及特殊生长因子；无菌操作包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌；微生物的接种方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法；微生物实验室分离中配制培养基的操作步骤：计算→称量→溶解→调pH→灭菌步骤。

（1）培养基一般采用高压蒸汽灭菌法；在配置培养时，需要先调节pH，后灭菌。

（2）接种可疑菌后，35℃培养24小时，液体培养基变浑浊，原因是细菌大量繁殖；根据实验的单一变量原则，对照组试管中应加入等量的生理盐水。

（3）与实验组同时培养6小时后，若实验组液体培养基的浑浊度比对照组低，则可明确疑似患者被炭疽杆菌感染；反之则排除。要运用实验的等量原则和单一变量原则以及对照原则，噬菌体的宿主具有专一性，患者被炭疽杆菌感染，则实验组加入的噬菌体就会侵染炭疽杆菌，炭疽杆菌就会裂解，细菌数量减少浑浊度低。

（4）计算微生物的数量应取三个平板的平均值，即（200+180+220）÷0.2=1000个/mL。该方法统计的结果低于实际值，因为当两个或两个以上细菌连在一起时，培养基上只看到一个菌落。

【点睛】解答本题的关键是掌握微生物的数量计算的方法，要取多个值的平均值，还要与体积相除。