Question

绿色荧光蛋白（GFP)会发出绿色荧光，该蛋白质在生物工程中有着广阔的应用前景。请据图回答相关问题：

（1）形成重组质粒时，如果限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是一G↓GATCC—，限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是一↓GATC—。在质粒上有酶Ⅰ的一个切点，在目的基因两侧各有一个酶Ⅱ的切点。在DNA连接酶和上述两种不同限制酶的作用下，能否将质粒和目的基因连接起来？_____________理由是__________。

（2）构建重组质粒时，限制酶切点应位于_____________和_____________之间，保证绿色荧光蛋白基因的正常表达。写山该基因表达过程包含的信息传递图【解析】
______________________。

（3）在②过程进行转基因体细胞的筛选时的方法是_______________________。

（4）在核移植过程中，乙兔提供的细胞应是______________________。

（5）通过推测氨基酸排序，可以找到______________，造出能吸收、发出不同颜色光的荧光蛋白，并能让它们发光更久、更强烈。

Answer

可以连接 由两种不同限制酶切割后形成的黏性末端相同（可互补） 启动子 终止子 转基因细胞发出绿色荧光 减数第二次分裂中期（次级）卵母细胞 对应脱氧核苷酸序列

【解析】试题分析：可以看出该荧光克隆兔涉及了多项生物工程技术．首先导入目的基因的甲兔的成纤维细胞要经过动物细胞培养筛选出转基因体细胞，然后该细胞与乙兔的卵细胞进行细胞核移植获得重组细胞，重组细胞经过早期胚胎培养到桑葚胚或囊胚期，最后经过胚胎移植技术将早期胚胎移植到代孕母兔子宫内，最后生成荧光克隆兔．该过程中利用基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术。

（1）①限制性内切酶Ⅰ的识别序列和切点是-G↓GATCC-，因此质粒被限制酶Ⅰ切割后所形成的黏性末端为：．

②限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点是-↓GATC-，因此目的基因两侧被限制酶Ⅱ切割后所形成的黏性末端为：．

③限制性内切酶Ⅰ和限制性内切酶Ⅱ的识别序列和切点不同，但两种切割形成的黏性末端相同，因此可在DNA连接酶的作用下连接起来，形成重组DNA分子. 。

（2）启动子是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，终止子的作用是使转录在所需要的地方停止，所以构建重组质粒时，限制酶切点应位于启动子和终止子之间，保证绿色荧光蛋白基因的正常表达．该基因表达过程包含的信息传递图【解析】
。

（3）在②过程进行转基因体细胞的筛选时，比较简易的筛选方法是转基因细胞能否发出绿色荧光。

（4）在核移植过程中，乙兔提供的细胞应是减数第二次分裂中期（次级）卵母细胞。

（5）通过推测氨基酸排序，可以找到 对应脱氧核苷酸序列，造出能吸收、发出不同颜色光的荧光蛋白，并能让它们发光更久、更强烈。