Question

为了研究“某酸奶中乳酸菌耐药情况”而制定的流程图，请分析回答：

（1）本研究使用的细菌培养基中特别加入了一定量的碳酸钙，乳酸菌在___________（生理过程）中产生的乳酸能与不溶性的碳酸钙生成可溶性的乳酸钙，从而在菌落周围形成溶钙圈。从功能角度分析，本研究使用的培养基属于___________。

（2）在利用高压蒸汽灭菌锅对培养基灭菌时，锅内水加热煮沸后，必须___________，以保证锅内气压上升，达到121℃。灭菌后的培养基应适当冷却后，在___________附近倒平板。

（3）在酸奶制作过程中要严格控制发酵条件是保证发酵正常进行的关键，通常所指的发酵条件包括______________________（至少写出两项）。一般情况下含抗生素牛奶不宜制作酸奶，原因是___________。

（4）请完善“检测乳酸菌对青霉素、四环素耐药性”实验操作步骤：
步骤1：分别取___________加入灭菌后冷却至50℃左右的三组无菌培养皿的培养基中，立即混匀，静置凝固成平板。
步骤2：向三组培养基中分别接种______________________。
步骤3：将接种后的三组培养基都置于适宜温度等条件下培养若干天，观察比较培养基中菌落生长情况。

Answer

无氧呼吸 鉴别培养基 将锅内冷空气彻底排除 酒精灯火焰 无菌、密闭（无氧） 抗生素抑制了乳酸菌的生长 等量的青霉素、四环素和无菌水 等量相同的待检测的乳酸菌菌种

【解析】（1）乳酸菌是厌氧细菌，进行无氧呼吸，将葡萄糖分解成乳酸。由题干可知，乳酸与不溶性的碳酸钙形成了溶钙圈，液体培养基中无法观察到该现象，表明该培养基从用途上说，属于鉴别培养基；从物理性质上说，属于固体培养基。

（2）利用高压蒸汽灭菌法灭菌时，将灭菌物品放入盛有适量水的高压蒸汽灭菌锅内，把锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排除后，将锅密闭，继续加热以保证锅内气压上升。为防止外界环境的污染，倒平板时需在酒精灯火焰附近进行。

（3）根据乳酸菌的代谢特点和发酵产物更多、更纯，所以发酵过程要密闭无氧的环境且无杂菌干扰。由于抗生素本身有抑制细菌生长繁殖的特性，而乳酸菌就是细菌的一种，所以乳酸发酵过程中不能加入抗生素，否则会抑制乳酸菌的生长。

（4）由题干可知，该实验目的为检测乳酸菌对青霉素、四环素的耐药性，因此青霉素和四环素的量是自变量。为了保证实验结果的可信度，需设置对照组，其余无关变量应保证相同且适宜。因此需取等量的青霉素、四环素和无菌水加入三组无菌培养皿中，再加入灭菌并冷却至左右的培养基，立即混匀，静置凝固成平板；再向三组培养基中分别接种等量相同的待检测的乳酸菌菌种，观察乳酸菌形成菌落的多少。

【点睛】注意：本题第（4）小题为了排除培养基对该实验的影响，最好再设置一个空白对照组保证实验结果的可信度。因此需将接种后的三组培养基和一个未接种的培养基都置于适宜温度下培养若干天后再观察比较菌落生长情况。