Question

常见的酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖，但自然界中的某些酵母可以分解木糖产生酒精，但对酒精的耐受能力较差，科学家们利用人工诱变的技术获得了能利用木糖且对酒精耐受力强的酿酒酵母突变型，请回答下列问题：

（1）获得上述突变型酿酒酵母的方法是：人工诱变后，使用_________________的液体培养基进行选择培养。

（2）获得上述突变型酿酒酵母后，需要进行分离纯化，操作步骤如图：

制备以上过程所需的培养基时需要倒平板操作，平板冷凝后需要倒置的原因是_______________，图乙是图甲过程A纯化培养的结果，接种时划线的顺序是________，图丙是图甲过程C纯化培养的结果，推测接种时主要的操作失误是_____________。

（3）为测定突变型酿酒酵母的活性，用适宜浓度的海藻酸钠溶液将活化的酵母细胞固定化后发酵无菌麦芽汁制酒，实验中当海藻酸钠浓度较低时，细胞活力较低原因是____。若发酵条件符合操作要求。10天后检查发酵液发现麦芽汁几乎无酒味，发酵失败最可能的原因是____。

（4）在血红蛋白的提取和分离实验中，从红细胞中释放出血红蛋白常用的方法是____，纯化蛋白质常用的方法是___ 。

Answer

木糖为碳源且添加一定浓度酒精的 防止皿盖上的冷凝水落入培养基造成污染 ①③② 涂布不均匀 海藻酸钠浓度较低时包埋不紧密，酶分子容易漏出，数量不足 将海藻酸钠熔化时未冷却就将活化的酵母菌液倒入 将红细胞放在蒸馏水和甲苯溶液中吸水胀破 凝胶色谱法(或电泳、透析法、离心沉降法)

【解析】试题分析：由题意知：“酿酒酵母只能利用葡萄糖而不能利用木糖来进行酒精发酵，而自然界中某些酵母菌能分解木糖产生酒精，但是对酒精的耐受能力差”，因此可以利用选择培养基筛选酿酒酵母突变型。

（1）根据题意可知，“科学家们利用人工诱变的技术获得了能利用木糖且对酒精耐受力强的酿酒酵母突变型”，因此获得上述突变型酿酒酵母可以在人工诱变后，使用木糖为碳源且添加一定浓度酒精的液体培养基进行选择培养。

（2）待平板冷凝后，要将平板倒置，其主要原因是防止培养皿盖的冷凝水落入培养基造成污染。在培养基上接种时划线的顺序依次是每一区的划线应从前一区划线的末端位置开始划线，从而能将菌种逐区减少，所以划线顺序是①③②；培养后菌落分布不均匀可能是接种时涂布不均匀造成的。

（3）酵母细胞的固定化的实验中，当海藻酸钠浓度较低时，包埋不紧密，酶分子容易漏出，数量不足，导致细胞活力较低。若发酵条件符合操作要求．10天后检查发酵液发现麦芽汁几乎无酒味，发酵失败最可能的原因是将海藻酸钠熔化时未冷却就将活化的酵母菌液倒入。

（4）在血红蛋白的提取和分离实验中，从红细胞中释放出血红蛋白常用的方法是将红细胞放在蒸馏水和甲苯溶液中吸水胀破，纯化蛋白质常用的方法是凝胶色谱法（或电泳、透析法、离心沉降法）。