Question

图（a）中的三个DNA片段上依次表示出了EcoR I、BamH I和Sau3A I三种限制性内切酶的识别序列与切割位点，图（b）为某种表达载体示意图（载体上的EcoR I、Sau3A I的切点是唯一的）。

根据基因工程的有关知识，回答下列问题：

（1）经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被____________酶切后的产物连接，理由是____________。

（2）若某人利用图（b）所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图（c）所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有____________，不能表达的原因是____________。

（3）DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有____________和___________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是____________。

Answer

Sau3A I 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端 甲和丙 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，两者目的基因均不能转录 E•coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 T4DNA 连接酶

【解析】试题分析：根据目的基因两端的限制酶切点确定限制酶的种类

①应选择切点位于目的基因两端的限制酶；②不能选择切点位于目的基因内部的限制酶；③为避免目的基因和质粒的自身环化和随意连接，也可使用不同的限制酶切割目的基因和质粒，但要确保质粒上也有这两种酶的切点。

（1）由于限制酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割后产生的片段具有相同的黏性末端，所以经BamH I酶切割得到的目的基因可以与上述表达载体被Sau3AⅠ酶切后的产物连接。

（2）启动子是一段有特殊序列的DNA片段，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。终止子也是一段有特殊结构的DNA短片段，相当于一盏红色信号灯，使转录在所需要的地方停止下来。在基因表达载体中，启动子应位于目的基因的首端，终止子应位于目的基因的尾端，这样目的基因才能表达。而图甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，两者目的基因均不能转录，所以都不能表达目的基因的产物。

（3）常见的DNA连接酶有E•coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中T4DNA连接酶既能连接黏性末端又能连接平末端。

【点睛】本题考查基因工程的相关知识，意在考查考生获取图示信息的能力、审题能力以及分析能力。重点考查基因工程的操作步骤，要求考生识记基因工程的操作步骤，掌握各步骤中采用的方法及需要注意的细节。