Question

科学家发现家蝇体内存在一种抗肿瘤蛋白（且具有抗菌能力），受到研究者重视。临床使用发现此蛋白质对肿瘤确实有良好的疗效，可以通过基因工程技术导入大肠杆菌内进行大量生产。其过程大体如图所示：

（1）在基因工程中，获取目的基因的方法有___________________（至少写出两种）。

（2）图中a过程叫_______________，它是基因操作的核心步骤，该过程中切质粒和目的基因的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端要满足____________条件。

（3）将抗肿瘤基因导入大肠杆菌，并在大肠杆菌细胞内成功表达产生了抗肿瘤蛋白，由于大肠杆菌具有__________________特点，因此在短时间内就能获得大量的抗肿瘤蛋白。

（4）细胞工程可以作为辅助手段，通过获得特定的单克隆抗体并与抗肿瘤蛋白结合制成“生物导弹”，以实现“靶向杀癌”。下面是单克隆抗体制备过程示意图，请据图回答：

① 图中A过程从小鼠的脾脏中取得的“小鼠细胞”是___________细胞，要获得能产生抗肿瘤蛋白抗体的杂交瘤细胞至少要经过__________次筛选。从小鼠体内提取分离该细胞之前，给小鼠注射的特定的物质是____________________。

② 为检测杂交瘤细胞是否成功的合成了单克隆抗体，可以采用____________的方法。

Answer

鸟枪法、人工合成法 pCR 构建基因表达载体 严格互补、繁殖快、代谢速度快 B 二 特异性的抗原 抗原抗体杂交

【解析】试题分析：基因工程技术的基本步骤：目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成；基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等；将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样．将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法；目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。单克隆抗体制备流程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（1）在基因工程中，获取目的基因的方法有从基因文库中获取目的基因（鸟枪法）、PCR扩增目的基因、人工合成目的基因。

（2）图中a表示构建基因表达载体，是基因工程的核心步骤。该过程中切质粒和目的基因的限制酶可以不同，但是产生的粘性末端要满足严格互补的条件。

（3）选用大肠杆菌作为受体细胞，由于其繁殖速度快、产量较高，因此可以在短时间内获得要表达的蛋白质。

（4）①单克隆抗体的制备过程中，采用的是已免疫的小鼠B细胞（浆细胞或效应B细胞），即经过注射特异性抗原，然后和骨髓瘤细胞的融合，需要经过至少两次筛选（第一次筛选获得杂交瘤细胞，第二次筛选获得能产生抗体的杂交瘤细胞），最终筛选出来的杂交瘤细胞。

②为检测杂交瘤细胞是否成功的合成了单克隆抗体，可以采用抗原抗体杂交的方法。

【点睛】解答本题的关键是掌握单克隆抗体的制备过程，了解图中的A、B过程，确定过程中需要经过几次筛选。