Question

回答下列（一）、（二）小题。

（一）回答与果酒及果醋制作有关的问题：

（1）葡萄酒的自然发酵过程中，菌种的来源主要是附在葡萄皮上的野生型酵母菌。要筛选得到纯净的酵母菌种，首先要配置培养基，配好后应置于压力锅内加热一段时间，以达到____________目的。加热结束后，不能立刻开锅，否则培养基会____________。在固体培养基上划线分离时，单菌落会出现在__________。在上述筛选过程中，不该出现的操作是____________。

（2）下图装置中弯曲的安全玻璃管可以让瓶中的二氧化碳气体排出，还可以____________。为了制作酒精含量较高（体积分数约为15%）、糖含量也较高的葡萄酒，可以向果汁中加入适量____________。

（3）果醋发酵过程中，随着发酵的进行，乙醇含量逐渐下降，这是由于醋杆菌在____________和酸性环境下将乙醉氧化为醋酸。

（二）基因敲除是针对某个序列己知但功能未知的基因，改变其基因结构，令该基因功能丧失，从而对生物体造成影响，进而推测出该基因功能的一门技术。以下是制备APOE 基因敲除小鼠的常规过程：

备注：neo基因是抗新霉素的抗药基因；APOE是指载脂蛋白E，参与脂蛋白的代谢与转化。

请回答：

（1）为了获得APOE基因，可以用____________或者PCR扩增。过程②中所需的工具酶有__________。Nco基因除了破坏APOE基因外，还具存的作用最可能是____________。

（2）培养小鼠胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备饲养层，用于饲养层的细胞—般是__________。经过⑥克降以后的细胞的后裔细胞辟称为纯系，细胞纯系的特点是____________，从而便于研究。

（3）纯合的APOE基因敲除小鼠____________（能/不能）表达APOE，与正常小鼠相比表现出 ____________性状。

Answer

灭菌 溢出（喷出） 划线的末端 C 减少氧气和杂菌进入 蔗糖 有氧（充氧） 化学方法合成 限制性核酸内切酶和DNA连接酶 作为标记基因，便于筛选 胚胎成纤维细胞 遗传性状均一，表现的性状相似 不能 脂蛋白的代谢和转化异常

【解析】本题综合考查果酒和果醋的制作、微生物接种操作、基因工程及其应用、胚胎干细胞培养等知识，要求考生能利用所学知识解读题干和图形信息，进行分析、推理和判断，进而回答相关问题，此题综合性较强，但难度一般。

（一）（1）葡萄酒的自然发酵过程中，菌种的来源主要是附在葡萄皮上的野生型酵母菌。要筛选得到纯净的酵母菌种，首先要配置培养基，配好后应置于压力锅内加热一段时间，以达到灭菌目的。加热结束后，不能立刻开锅，否则培养基会溢出（喷出）。在固体培养基上划线分离时，单菌落会出现在划线的末端。在上述筛选过程中，不该出现的操作是C，即不能手持培养皿直接用酒精灯火焰给培养皿加热。

（2）图示装置中弯曲的安全玻璃管可以让瓶中的二氧化碳气体排出，还可以减少氧气和杂菌进入，有利于酵母菌无氧呼吸。为了制作酒精含量较高（体积分数约为15%）、糖含量也较高的葡萄酒，可以向果汁中加入适量蔗糖。

（3）果醋发酵过程中，随着发酵的进行，乙醇含量逐渐下降，这是由于醋杆菌在有氧（充氧）和酸性环境下将乙醉氧化为醋酸。

（二）（1）为了获得APOE基因（目的基因），可以用化学方法合成或者PCR扩增。过程②是形成重组质粒的过程，该过程中所需的工具酶有限制性核酸内切酶和DNA连接酶。Nco基因除了破坏APOE基因外，还具存的作用最可能是作为标记基因，便于筛选出能在含新霉素的培养基中生长的受体细胞。

（2）培养小鼠胚胎干细胞时，首先要在培养皿底部制备饲养层，用于饲养层的细胞—般是胚胎成纤维细胞。经过⑥克降以后的细胞的后裔细胞群称为纯系，细胞纯系的特点是遗传性状均一，表现的性状相似，从而便于研究。

（3）纯合的APOE基因敲除小鼠由于APOE基因结构被破坏，因而不能表达APOE，由于APOE参与脂蛋白的代谢与转化，因此与正常小鼠相比APOE基因敲除小鼠会表现出脂蛋白的代谢和转化异常性状。