Question

多氯联苯是一种对人体有很大危害的有机物质，污染土壤后，很难清除。研究发现，部分酵母菌具有分解多氯联苯的作用。为消除这种污染，科研人员计划从污染的土壤中筛选出高效分解多氯联苯的菌株。请回答问题：

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品__________，接种到以__________为唯一碳源的培养基上，从功能上讲，该培养基属于__________培养基。

（2）对初步提取到的菌株要进行____________________培养，一般操作方法有两种，其中之一是下图所示的__________法。

稀释倍数 菌落数 平板编号	1	2	3
10	420	495	393
100	45	57	51
1000	2	7	3

（3）将酵母菌溶液分别稀释10倍、100倍、1000倍。每个浓度都接种三个平板，每个平板均接入0.1mL稀释菌液，该接种方法是__________。培养时，需将培养皿__________培养，以防冷凝水造成污染。经适当培养后，平板上的菌落数如上表所示：据此可得出，每升菌液中酵母菌活菌数为__________个。

Answer

稀释（溶解） 多氯联苯 选择 纯化 平板划线 稀释涂布平板 倒置 5.1×107

【解析】试题分析：本题主要考查微生物的培养与应用的相关问题，利用选择培养基筛选出高效分解多氯联苯的菌株，其中涉及培养基的配置与选择，器具的灭菌方法，细菌分离纯化及计数方法等。需要学生掌握以下知识点，1、培养基按功能分为两类，选择培养基与鉴别培养基，两种培养基的制备方法、特征及用途见下表：

种类

制备方法

特 征

用 途

选择培养基

培养基中加入某种化学成分，抑制不需要微生物的生长

根据某种微生物的特殊营养要求或其对某化学、物理因素的抗性而设计的培养基，使混合菌样中的劣势菌变成优势菌，从而提高该菌的筛选率

培养分离出特定微生物，如：加入青霉素分离得到酵母菌和霉菌

鉴别培养基

在培养基中加入某种试剂或化学药品

依据微生物产生的某种代谢产物与培养基中特定试剂或化学药品反应，产生明显的特征变化而设计

鉴别和区分菌落相似的微生物，如伊红和美蓝培养基可以鉴别大肠杆菌

2、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）筛选分解多氯联苯的菌株时，应将土壤样品稀释，接种到以多氯联苯为唯一碳源的培养基上；只有能分解多氯联苯的菌株才能在这样的培养基中生存，因此从功能上讲，该培养基属于选择培养基。

（2）对初步提取到的菌株要进行纯化培养，一般操作方法有两种，即平板划线法和稀释涂布平板法，图示是利用平板划线法进行微生物接种，把聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。

（3）将酵母菌溶液分别稀释10倍、100倍、1000倍。每个浓度都接种三个平板，每个平板均接入0.1mL稀释菌液，该接种方法是稀释涂布平板。培养时，需将培养皿倒置培养，以防冷凝水造成污染。对菌落进行计数时，一般选择菌落数在30～300的进行记数，求其平均值，因此选择稀释100倍的三个培养基进行计算，每升溶液中酵母菌活菌数=（45+57+51）÷3÷0.1×100×1000=5.1×107个/L。