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为了从动物组织中提取纯净的DNA,首先要快速、有效地消化裂解动物组织细胞。消化裂...

为了从动物组织中提取纯净的DNA,首先要快速、有效地消化裂解动物组织细胞。消化裂解动物组织常用的方法有蛋白酶(如蛋白酶K)水解、表面活性剂处理、变性剂处理等。某科研人员拟使用加酶洗衣粉消化裂解猪肌肉样本,并提取猪的DNA。实验步骤如下:

①取500mg剪碎的猪肌肉组织于离心管中,加40mg加酶洗衣粉和1.5mL超纯水混合,在一定温度条件下水浴消化24h。

②加入苯酚、氯仿、异丙醇(25:24:1)混合液抽提。

③加0.2mg/mL的RNA水解酶于37℃水浴。

④加酸酸钠和无水乙醇,4000r/min高速离心15min。

⑤用70%乙醇洗涤沉淀两次,风干,得到高纯度的DNA。

请回答有关问题:

(1)加酶洗衣粉可以消化裂解动物组织细胞的原理是_________________________

(2)步骤②的目的是_________________。步骤③的目的是_______________

(3)步骤④中使用无水乙醇的目的是__________________________。高速离心时温度保持在4℃的原因有_______________________________________ 等。

(4)若是从血细胞中提取DNA,则选择________(选填“鸡血”或“哺乳动物红细胞”)。破碎细胞时,向血细胞液中加入一定量的_______,同时用玻璃棒搅拌,过滤后收集滤液即可。

 

洗衣粉中蛋白酶和表面活性剂等可以破坏细胞膜 使蛋白质变性,抽提蛋白质 水解RNA 析出DNA,提取含杂质较少的DNA 降低核酸水解酶的活性,防止DNA降解 降低分子运动,易于形成沉淀析出(增加DNA分子的柔韧性,减少断裂) 鸡血 蒸馏水 【解析】 本题以实验操作步骤为情境,考查学生对“DNA粗提取和鉴定”的实验原理、加酶洗衣粉的内涵、影响酶活性的因素等相关知识的识记和理解能力,以及对相关实验涉及的方法和技能进行综合运用的能力。 (1) 由于加酶洗衣粉中的蛋白酶和表面活性剂等可以破坏细胞膜,所以加酶洗衣粉可以消化裂解动物组织细胞。 (2) 苯酚、氯仿、异丙醇混合液可以促进蛋白质变性,因此步骤②的目的是使蛋白质变性,抽提蛋白质。RNA水解酶可以催化RNA水解,所以步骤③的目的是水解RNA。 (3) DNA不溶乙醇溶液,但细胞中的某些蛋白质可溶于乙醇,所以步骤④中使用无水乙醇的目的是析出DNA,提取含杂质较少的DNA。低温可以降低核酸水解酶的活性,防止DNA降解,同时低温还能降低分子运动,易于形成沉淀析出(或低温能增加DNA分子的柔韧性,减少断裂),所以高速离心时应将温度保持在4℃的低温条件下。 (4) 动物细胞中的DNA主要分布在细胞核中,少量分布在线粒体中。哺乳动物成熟的红细胞没有细胞核和众多的细胞器,难以提取到DNA;鸡血的红细胞有细胞核,DNA含量多。可见,若是从血细胞中提取DNA,则选择鸡血。破碎细胞时,向血细胞液中加入一定量的蒸馏水,同时用玻璃棒搅拌,以加快细胞吸水涨破,内容物流出。
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考点分析:
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根据材料回答下列有关问题:

Ⅰ.某大学科研人员利用双重固定法,即采用戊二醛作交联剂(使酶相互连接),海藻酸钠来包埋小麦酯酶,研究固定化酶的性质,并对其最佳固定条件进行了探究。下图显示的是部分研究结果 (注:酶活力为固定化酶催化化学反应的总效率,包括酶的活性和酶的数量)。

⑴从如图可以看出:固定化小麦酯酶比游离的小麦酯酶对温度变化的适应性更_____

⑵从如图可以看出:海藻酸钠浓度为3%时的小麦酯酶活力最强。当海藻酸钠浓度较低时,酶活力较低的原因是_____________________________

Ⅱ.制备固定化酵母细胞的过程如下:

⑴活化就是让处于休眠状态的微生物重新恢复___________________状态。

⑵影响此实验成败的关键步骤是配制海藻酸钠溶液,此步的操作应采用_______,以防止发生焦糊现象。

⑶海藻酸钠溶液必须冷却至室温后才能和酵母混合,原因是___________________

⑷刚形成的凝胶珠要在CaCl2溶液中浸泡30 min左右,目的是________________

⑸如果制作的凝胶珠颜色过浅,呈白色,则说明海藻酸钠浓度_________(过低/过高)。

⑹此固定酵母细胞的方法是________法,固定化酵母细胞的优点是_______________

⑺制备固定化酶则不宜用此方法,原因是________________________

 

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某生物兴趣小组用加酶洗衣粉进行探究实验,下表(不同温度除去不同污渍所需时间对照表)是他们记录的原始数据:

(1)该实验的自变量是_________________,因变量是_______________,实验中最好用全自动洗衣机进行洗涤,原因是__________________

(2)在适宜温度范围内,加酶洗衣粉对上述三种污渍洗涤效果最佳的是_________

(3)加酶洗衣粉中的酶______(填“是”或“不是”)固定化酶,理由是______________

 

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为探究微生物的抗性突变是自发产生的还是与相应的环境因素有关,有人设计了下列实验。实验选用对链霉紊敏感的原始大肠杆菌K12,培养基3、7、11中含有链霉素,其它培养基中不含链霉素。请回答下列问题:

 

(1)将对链霉紊敏感的原始大肠杆菌K12菌种涂布在培养基1的表面培养,接着通过右图“印章”将培养基1中的菌群对应“印”在培养基2、3上培养。培养基3的A点处有菌落生长,将培养基2中相应的A点位置上的菌落挑出少量移入试管4中,反复几次实验,结果如图所示。请推测本实验可得出的结论是________________________,并分析说明理由:__________________

(2)培养基3、7、11中的菌落具有_____________特性。逐一比较3号和2号培养基、7号和6号培养基、11号和10号培养基后发现,两培养基菌落数越来越接近,说明_____________。此现象的形成是__________________的结果。

(3)4号、8号试管在本实验中的作用是______________________。12号试管中的培养基除水、无机盐外,还必须含有____________________________等基本成分。

(4)微生物实验中对培养基、接种环、实验操作者的双手通常所采用的灭菌或消毒方法的标号依次是______________。(①高压蒸汽灭菌  ②灼烧灭菌   ③化学消毒)

(5)若一培养基中有5种营养缺陷型菌株1、2、3、4、5,它们都是基因突变的结果,它们都不能合成生长所必需的物质G,已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物,但不知这些物质合成的顺序,于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响,结果如下表所示。那么这几种物质的合成顺序应是__________

物质

培养基中加入的物质

突变体

A

B

C

D

E

G

    l

-

-

-

+

-

+

    2

-

+

-

+

-

+

    3

-

-

-

-

-

+

    4

-

+

+

+

-

+

    5

+

+

+

+

-

+

 

+:表示生长  一:表示不生长

 

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多环芳烃菲在染料、杀虫剂等生产过程中被广泛使用,是土壤、河水中常见的污染物之一。下图表示科研人员从被石油污染的土壤中分离获得能降解多环芳烃菲菌株Q的主要步骤。请回答:

(1)步骤①→③的培养过程中,培养液中加入多环芳烃菲作为唯一碳源,目的是_____________

(2)步骤①→③的培养过程中,需将锥形瓶放在摇床上振荡,一方面使菌株与培养液充分接触,提高营养物质的利用率;另一方面能______________________________

(3)步骤④用平板划线法纯化菌株Q过程中,在做第二次以及其后的划线操作时,总是从上一次划线的末端开始划线,原因是 ______________________。为了筛选出高效菌株,可比较单菌落周围分解圈的大小,分解圈大说明该菌株的降解能力 _________

(4)接种环通过灼烧来灭菌,完成步骤④中划线操作,共需灼烧接种环__________次。

 

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某家庭拟自制酵母菌菌种酿制葡萄酒,请帮助完成酿制计划,并分析相关问题:

(1)制菌种步骤1:挑选白色斑点较多的葡萄,取皮加入培养液中,获得提取液。

①葡萄上的白色斑点很可能是__________________________________

步骤2:菌种纯化 

②图乙所示的菌种纯化方法是______________

步骤3:将菌种用培养液扩大培养。

③若要对培养液中的酵母菌计数可采用血球计数板操作,方法是:先将_____放在计数室上,用吸管吸取稀释后的培养液滴于其边缘,让培养液自行渗入,在显微境下计数;也可采用图甲所示的方法____________。在相同条件下,采用上述两种方法对同一培养液进行计数时,在操作和计算均正确的前提下,发现前者计数结果明显偏大,可能的原因是________

(2)挑选葡萄冲洗并晾干。

(3)破碎装瓶:不要将瓶装满,要留1/3的空间。

(4)接种并加糖发酵:所加糖量不要太多,可按照10∶1的比例加糖。若所加糖量过多,可能会导致_________________________

(5)过滤:约一星期后将发酵液用尼龙布反复过滤,充分去除渣滓。

(6)密封:后期发酵。

 

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