Question

三孢布拉氏霉菌由于β-胡萝卜素含量高、易于培养等特点而广泛应用于工业化β-胡萝卜素的生产。请回答下列问题：

（1）用稀释涂布平板法可以纯化三孢布拉氏霉菌，进行梯度稀释时一般是将1mL菌液移入盛有______mL无菌水的试管中，进行活菌计数时，统计的菌落数往往比活菌的实际数目低，原因是______。

（2）用平板划线法分离该细菌。在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线。这样做的目的是______。

（3）现有“乙醇”、“石油醚”、“乙醚”三种溶剂，应选用其中的______作为胡萝卜素的萃取剂，不选择其他两种的原因是______；萃取的效率主要取决于萃取剂的______和______。

Answer

9 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落 石油醚 乙醇为水溶性有机溶剂，乙醚沸点较低 性质 使用量

【解析】

1、微生物常见的接种的方法：①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、胡萝卜素的化学性质稳定，不溶于水，微溶于乙醇，易溶于石油醚等有机溶剂，常采用萃取法提取。胡萝卜素的提取流程为：红萝卜-粉碎-干燥-萃取-过滤-浓缩-胡萝卜素。

（1）进行梯度稀释时，需要将1mL菌液移入盛有9ml的无菌水中。稀释涂布平板法常用来进行微生物的计数，其原理是培养基表面的一个菌落来源于（稀释液中的）一个活菌，由于菌落可能是由两个或多个细胞形成，所以统计的菌落数往往少于稀释液中的活菌数。

（2）平板划线法分离细菌过程中，在第二次及以后的划线时，总是从上一次划线的末端开始划线，这样做的目的是将聚集的菌体逐步稀释以便获得单个菌落。

（3）萃取胡萝卜素的有机溶剂应该能够充分溶解胡萝卜素，并且不与水混溶，故应选用其中的石油醚作为胡萝卜素的萃取剂，而乙醇为水溶性有机溶剂，乙醚沸点较低，因此不选择乙醇和乙醚作为胡萝卜素的萃取剂。萃取的效率主要取决于萃取剂的性质和使用量。