Question

基因工程又称为DNA重组技术，回答相关问题：

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径， 即_____和从生物材料中分离；分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是______。

（2）在基因表达载体中，启动子是_________聚合酶识别并结合的部位；若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，最常用的原核生物是______；假设某种转基因作物因为受到病毒感染而减产，若要以该转基因作物为材料获得脱毒苗，应选用__________作为外植体进行组织培养。

（3）利用某植物的成熟叶片为材料，同时构建cDNA文库和基因组文库，两个文库相比，cDNA文库中含有的基因数目比基因组文库中的少，其原因是______。

Answer

人工合成 DNA分子杂交 RNA 大肠杆菌（或答细菌） 茎尖 cDNA文库中只含有叶细胞已转录（或已表达）的基因，而基因组文库中含有该植物的全部基因

【解析】

1、基因文库是指将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。基因组文库包含某种生物所有的基因；部分基因文库包含某种生物的部分基因，如：cDNA文库。

2、将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

3、目的基因的检测与鉴定：（1）分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．（2）个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

4、基因表达载体的构建：①过程：用同一种限制酶切割目的基因和运载体，再用DNA连接酶将目的基因和运载体连接形成重组DNA分子。②目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在并且可以遗传给下一代并表达和发挥作用。③基因表达载体的组成：目的基因+启动子+终止子+标记基因。

（1）启动子在基因的首段，它是RNA聚合酶的结合位点，能控制着转录的开始；
（2）终止子在基因的尾端，它控制着转录的结束；
（3）标记基因便于目的基因的鉴定和筛选。

（1）在基因工程中，获取目的基因主要有两大途径，即人工合成和从生物材料中分离，人工合成可通过反转录法或人工化学合成法，从生物材料中分离即通过基因文库法。分子水平上检测目的基因是否成功导入酵母菌的方法是DNA分子杂交法。

（2）基因表达载体的组成包括目的基因+启动子+终止子+标记基因，其中启动子是RNA聚合酶识别并结合的部位；若采用原核生物作为基因表达载体的受体细胞，由于细菌繁殖速度快，故最常用的原核生物是大肠杆菌等细菌。若要获得脱毒的幼苗，应该采用茎尖分生区作为外植体进行植物组织培养。

（3）构建cDNA文库时以成熟叶片叶肉细胞内的mRNA为模板进行逆转录得到的，因此cDNA文库中只含有叶细胞已转录（或已表达）的基因，而构建的基因组文库包含该种植物所有的基因。