Question

自然界中的微生物往往是混杂生长的。人们在研究微生物时一般要将它们分离提纯，然后进行数量的测定。下面是对大肠杆菌进行数量测定的实验，请回答有关问题。步骤如下：

（1）制备稀释倍数范围为__________________________的系列稀释液。

（2）下图中A、B两种接种方法，常用来统计样品活菌数目的方法是[    ]_______________________。

（3）适宜温度下培养。

①为测定大肠杆菌数，在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，得到以下几种统计结果，正确可信的是____________。

A.一个平板，统计的菌落数是23

B.两个平板，统计的菌落数是22和26，取平均值24

C.三个平板，统计的菌落数分别为21、5和52，取平均值26

D.四个平板，统计的菌落数分别是21、30、24和25，取平均值25

②一同学在对应稀释倍数为10⁶的培养基中，测得平板上菌落数的平均值为23.4，那么每毫升样品中的菌落数是（涂布平板时所用稀释液的体积为0.05mL）________________________。

Answer

103-107 A稀释涂布平板法 D 4.68108

【解析】

微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。

1、平板划线法通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后，可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的菌落。

2、稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。在稀释度足够高的菌液里，微生物被分散成单个细胞，从而能在培养基表面形成单个的菌落。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。

（1）制备稀释倍数范围为103、104、105、106、107的系列稀释液。

（2）由A图可知，菌落随机分布在培养基表面，故图中A表示的是稀释涂布平板法。由B图可知，从第1区域到第5区域菌落数逐渐减少，故图中B表示的是平板划线法。其中，常用稀释涂布平板法来统计样品活菌数目，即图中的A。

（3）①为了避免偶然性因素的影响，使结果接近真实值，应设置三个或三个以上的平板，计算出菌落平均。A中只有一个平板，B中只有两个平板，统计结果不可信，AB错误。计算时，明显偏离实际值（可参照本组实验其他平板的计数值）的应舍弃后再求平均值，C中菌落数为5和52的平板明显偏离实际值，应舍弃，舍弃后只剩下一个平板，统计结果不可信，C错误；D中四个平板上的菌落数相差不大，且没有明显偏离实际值，故D的统计结果可信，D正确。

②每毫升样品中的菌落数=C/V×M=23.4÷0.05×106=4.68108个。