Question

凝胶色谱技术是二十世纪六十年代初发展起来的一种快速而又简单的分离技术，由于设备简单、操作方便，不需要有机溶剂，对高分子物质有很高的分离效果，目前已经被广泛应用于多个领域，请回答有关问题。

（1）若选用 Sephadex G-100，则G表示_____________________________________________________。

（2）通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步______________________，在血红蛋白的提取和分离实验中有以下操作，试回答：

①实验时要对采集到的血液中的红细胞进行洗涤，洗涤的目的是______________________________________________________________。

②在______________作用下，红细胞会破裂释放出血红蛋白。

③将释放出的血红蛋白收集到透析袋中透析，这是样品的_________________，而透析的目的是_____________________________________________。

④实验最后经过SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳进行_____________________________。

（3）装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现气泡必须重装。这是因为_____________________________________________________。

Answer

凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围 纯化 去除血浆蛋白 蒸馏水和甲苯 粗分离 去除相对分子质量较小的杂质 纯度鉴定 气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果

【解析】

凝胶色谱法也称做分配色谱法，是根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。所用的凝胶实际上是一些微小的多孔球体，在小球体内部有许多贯穿的通道，当相对分子质量不同的蛋白质通过凝胶时，相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度较慢；而相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶外部移动，路程较短，移动速度较快。

（1）若选用SephadexG—100，则G表示凝胶的交联程度、膨胀程度及分离范围，100表示凝胶得水值，即每克凝胶膨胀时可吸水10克。

（2）通过凝胶色谱法可将从红细胞中分离出的血红蛋白样品进一步纯化。

①实验时为了去除血浆蛋白，要用0.9%的生理盐水对采集到的血液中的红细胞进行洗涤。

②在蒸馏水和甲苯的作用下，红细胞会破裂释放出血红蛋白。

③将释放出的血红蛋白收集到透析袋中透析，这是样品的粗分离，而透折的目的是去除相对分子质量较小的杂质。

④验最后经过SDS——聚内烯酰胺凝胶电泳进行纯度鉴定。

（3）由于气泡会搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，因此装填凝胶色谱柱时，要注意色谱柱内不能有气泡存在，一旦发现气泡必须重装。