Question

研究人员成功地从土壤中筛选到能产生纤维素酶的微生物。请就如何从土壤中获得纤维素分解菌回答以下问题：

（1）纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少包括三种组分，即            。

（2）若获得纯净的菌株，常采用            进行接种，此过程所用的接种工具是接种环，操作时采用              灭菌的方法。

（3）刚果红可以与纤维素等多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的        和葡萄糖发生这种反应。常用的刚果红染色法有两种：第一种是先培养微生物，再加入刚果红进行颜色反应；第二种是在              时就加入刚果红。            （填“第一种”或“第二种”）方法会使菌落之间发生混杂。

（4）如果观察到产生              的菌落，说明可能获得了纤维素分解菌。为了确定是纤维素分解菌，还需要进行发酵产纤维素酶的实验。

（5）下图为实验室培养和纯化菌种过程中的部分操作步骤，下列说法错误的是（  ）

A．①②③步骤操作时需要在酒精灯火焰旁进行

B．步骤③中，每次划线前后都需对接种环进行灼烧处理

C．步骤①中待倒入的培养基冷却后盖上培养皿的皿盖

D．划线接种结束后，将图④平板倒置后放入培养箱中培养

Answer

（1）C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶（2分）（写不完全都不得分）

（2）平板划线法（2分） 灼烧（2分）

（3）纤维二糖（2分） 倒平板（2分） 第一种（2分）

（4）透明圈（2分）

（5）C（1分）

【解析】

试题（1）纤维素酶包括C1酶，CX酶和葡萄糖苷酶。

（2）纯化菌种可以用稀释涂布平板法和平板划线法，因为后面需要用接种环，所以只能是平板划线法，接种环在使用时需要进行灼烧灭菌。

（3）刚果红可以与纤维素等多糖物质形成红色复合物，但并不和水解后的纤维二糖和葡萄糖发生这种反应，因此可以用刚果红染色体法鉴别是否有纤维素分解菌。刚果红的加入方法有两种，可以在培养微生物之后也可以在倒平板时就加入，但第一种即培养微生物后加入刚果红染液时会使菌落之间发生混染的现象。

（4）如果观察到透明圈就说明可能有纤维素分解菌，因为透明圈是以纤维素分解菌为中心而形成的，要确定是否得到可以进行发酵产纤维素酶的实验。

（5）图中1是倒平板，2是蘸取菌液，3是划平板，这些操作都需要在酒精灯附近进行，故A正确。在接种时每次划线前后都应该灼烧接种环，故B正确。倒平板后应盖上培养皿盖，只是应倒置，故C错误。接种结束后应倒置放到培养箱中，故D正确。