Question

有机磷农药使用不当有时会造成瓜果蔬菜等食品农药残留超标，危害人类健康。某生物兴趣小组同学提出：土壤中可能存在高效降解有机磷农药的微生物。请回答下列问题：

（1）在制备固体培养基时需加入的常用凝固剂是__________。若培养基需要调节pH，则应在灭菌之____(填“前”或“后”）调节。

（2）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，可在被有机磷农药污染土壤中取样，并在培养基上添加适量的______________进行选择培养。分离纤维素分解菌，宜从富含纤维素的土壤中取样。纤维素分解菌之所以能够利用纤维素维素，是因为其细胞内含有纤维素酶，纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即 __________________ 。前两种酶使纤维素分解成 ___________ ， 第三种酶将它分解成葡萄糖。

（3）该小组在接种前，随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，这样做的目的是____________________________________。

（4）若要测定培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用___________________直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目，当样品的___________足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的______________。用这种方法测定菌体密度时，实际活菌数量要比测得的数量多，是因为__________________________________。

（5）将获得的3种待选微生物菌种甲、乙、丙分别接种在1L含20mg有机磷农药的相同培养液中培养（培养液中其他营养物质充裕、条件适宜），观察从实验开始到微生物停止生长所用的时间，甲、乙、丙分别为32小时、45小时、16小时，则应选择微生物__________（填“甲”、“乙”或“丙”）作为菌种进行后续培养。

Answer

琼脂 前 有机磷农药 C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶 纤维二糖 检测培养基平板灭菌是否合格 血细胞（血球）计数板 稀释度 一个活菌 当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落 丙

【解析】

为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，就要人为提供有利于该微生物的生长条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长，因此所用的选择培养基除了含有碳源、氨源及水和无机盐等微生物生长所需的基本营养成分外，还需添加适量的有机磷农药，以便进行选择培养。

（1）在制备固体培养基时，常需加入凝固剂琼脂。平板培养基配制的基本流程为：计算→称量→溶化→调节pH→灭菌→倒平板，即调节pH应在灭菌之前调节。

（2）为了获得能降解有机磷农药的微生物菌种，就要人为提供有利于该微生物的生长条件，同时抑制或阻止其他微生物的生长，因此所用的选择培养基除了含有碳源、氨源及水和无机盐等微生物生长所需的基本营养成分外，还需添加适量的有机磷农药，以便进行选择培养。纤维素酶是一种复合酶，一般认为它至少含有三种组分，即C1酶、CX酶、葡萄糖苷酶。前两种酶使纤维素分解成纤维二糖， 第三种酶将纤维二糖分解成葡萄糖。

（3）为检测培养基平板灭菌是否合格，在接种前需随机取若干灭菌后的空白平板先培养一段时间，观察有无菌落形成，若无菌落形成，则说明培养基平板灭菌合格。

（4）测定并统计培养液中选定菌种的菌体数，既可在显微镜下用血细胞（血球）计数板直接计数，也可选用稀释涂布平板法统计活菌数目。当样品的稀释度足够高时，培养基表面一个活菌就生长为一个菌落。用这种方法测定菌体密度时，由于存在少数两个或多个活菌细胞连在一起的现象，而平板上观察到的只是一个菌落，所以实际活菌数量要比测得的数量多。

（5）依题意可知，甲、乙、丙培养液中的微生物从实验开始到停止生长所用的时间分别为32小时、45小时、16小时，说明微生物丙分解有机磷农药的能力比甲、乙强，因此应选择微生物丙作为菌种进行后培养。