Question

回答下列（一）、（二）两个小题。

（一）脲酶是催化尿素分解的特异性水解酶。该酶主要从刀豆等豆科植物中提取，现被广泛应用于尿素废水的净化过程。请分析回答以下问题：

(1)脲酶可以催化尿素分解为________，其中碱性物质可以能使_______指示剂变为________。

(2)为了提高脲酶的利用效率，可以采用固定化酶技术将其固定。酶的固定化方法有：吸附法、交联法、包埋法和________。

(3)实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用__________，目的是除去未吸附的游离脲酶。

(4)脲酶除了从植物获取外，还可以来源于土壤中的微生物。为了从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物，采用的分离方法操作最简便的是____________。下列有关该分离方法操作的叙述，错误的是________。

A．必须使用固体培养基

B．必须在酒精灯火焰旁接种

C．必须将接种后的培养皿倒置培养

D．必须将接种前的培养皿、培养基、土壤悬浮液等进行灭菌处理

(二)如图表示动物细胞克隆和制备单克隆抗体的相关过程，请回答下列问题：

(1)过程①常应用________方法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身的不同组织或器官，说明这些细胞具有________性。

(2)该过程利用了甲细胞具有的________能力，甲和乙细胞可经过生物诱导剂____________________的作用形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去________的小鼠成纤维细胞的特定培养体系中培养，最后产生大量的细胞群，这种方法为________法。

(3)下列关于经③和④过程得到单克隆抗体的叙述，错误的是 _________

A．该过程应用了细胞膜具有流动性的原理

B．丙细胞要具有分泌多种抗体的能力

C．该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术

D．丙细胞的形成先通过筛选得到杂交瘤细胞，再进行抗体检验

Answer

NH3和CO2 酚红 红色 共价偶联法 10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱 划线分离法 D 显微注射 发育全能 连续增殖 (灭活的)仙台病毒 增殖力 克隆培养 B

【解析】

（一）1、选择培养基选择分解尿素的微生物的原理：培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。
2、分解尿素的细菌的鉴定细菌合成的脲酶将尿素分解成氨，氨会使培养基的碱性增强。在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂培养细菌，若指示剂变红，可确定该种细菌能够分解尿素。
3、微生物常见的接种的方法
①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。
②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（二）1、动物细胞培养需要满足以下条件
（1）充足的营养供给--微量元素、无机盐、糖类、氨基酸、促生长因子、血清等。
（2）适宜的温度：36.5℃±0.5℃；适宜的pH：7.2～7.4。
（3）无菌、无毒的环境：培养液应进行无菌处理。通常还要在培养液中添加一定量的抗生素，以防培养过程中的污染。此外，应定期更换培养液，防止代谢产物积累对细胞自身造成危害。
（4）气体环境：95%空气+5%CO2．O2是细胞代谢所必需的，CO2的主要作用是维持培养液的pH。
2、单克隆抗体的制备过程：先给小鼠注射特定抗原使之发生免疫反应，之后从小鼠脾脏中获取已经免疫的B淋巴细胞；诱导B细胞和骨髓瘤细胞融合，利用选择培养基筛选出杂交瘤细胞；进行抗体检测，筛选出能产生特定抗体的杂交瘤细胞；进行克隆化培养，即用培养基培养和注入小鼠腹腔中培养；最后从培养液或小鼠腹水中获取单克隆抗体。

（一）（1）脲酶可以催化尿素分解为NH3和C02，其中碱性物质可以能使酚红指示剂变为红色。

（2）酶的固定化方法有：吸附法、共价偶联法、包埋法和交联法。
（3）实验室中可以采用吸附法将该酶制成固定化酶柱，让尿素废水过柱前，先用10倍体积的蒸馏水洗涤酶柱，目的是除去未吸附的游离脲酶。
（4）分离微生物常用稀释涂布平板法和平板划线法，其中平板划线法是从土壤中分离得到以尿素为氮源的微生物的最简便的方法．采用平板划线法时，必须使用固体培养基；为了防止杂菌污染，必须在酒精灯火焰旁接种；配置培养基时，必须将接种后的培养皿倒置培养，防止皿盖上的水珠滴入培养基污染培养基；必须将接种前的培养皿、培养基等进行灭菌处理，对土壤悬浮液不能进行灭菌处理，否则会杀死目的菌。故选D。

（二）（1）由图示可知，过程①常应用显微注射方法导入重组诱导基因后得到干细胞；部分干细胞经过诱导可分化成全身的不同组织或器官，说明这些细胞具有发育全能性。在动物细胞培养过程中培养液 中必须通入 O2和 CO2，通入 CO2的目的是维持培养液的 pH。
（2）该过程利用了甲细胞具有发育全能性的能力。制备单克隆抗体过程中，甲和乙细胞可经过生物诱导剂灭活的仙台病毒的作用融合形成丙细胞。取一个丙细胞，放在含大量失去增殖力的小鼠成纤维细胞的特定培养体系中培养，最后产生大量的细胞群，这种方法为克隆培养法。
（3）该过程中，动物细胞融合应用了细胞膜具有流动性的原理，A正确；丙细胞只具有分泌专一抗体的能力，B错误，该过程应用了动物细胞融合和动物细胞培养技术，C正确；丙细胞的形成先通过筛选得到杂交瘤细胞，再进行专一抗体检验，D正确。即关于经③和④过程得到单克隆抗体的叙述，错误的是B。