Question

植物基因工程中，往往用光诱导型启动子(PrbcS)使目的基因表达，其结合T基因后能使目的基因更高水平表达。下图中①和②都为基因表达载体构建过程中的中间载体，请分析重组载体的部分构建过程并回答下列问题：

注：Amp^r/Km^r分别为氨苄青霉素/卡那霉素抗性基因。origin为复制原点，其余为限制酶酶切位点。

（1）对双子叶植物进行基因工程改造最常用的方法是____________，还需结合__________技术才能获得新性状的植株。

（2）中间载体通常用______________法导入微生物中扩增，含有中间载体②­PrbcS­^*T的微生物________（“能”或“不能”）在含有卡那霉素的培养基中生长，________（“能”或“不能”）在含有氨苄青霉素的培养基中生长。

（3）经酶切后凝胶电泳，测得2B片段为0.4kb，经图示信息分析，Prbcs­^*T的长度约为____________________。据图分析，中间载体②­2B形成中间载体②­PrbcS­^*T，需要使用限制酶_________________切割。

（4）在T基因前“点突变引入NcoⅠ”酶切位点的方法是：设计包含_________识别序列的引物，然后用PCR技术扩增。

Answer

农杆菌转化法 植物组织培养 感受态细胞 能 不能 1.7 kb HindⅢ和EcoRⅠ NcoⅠ

【解析】

本题考查基因工程和植物细胞工程的相关知识，意在考查考生的识图能力和理解所学知识要点，把握知识间内在联系，形成知识网络结构的能力；能运用所学知识，准确判断问题的能力。

（1）将目的基因导入双子叶植物常利用农杆菌转化法；要想获得转基因植物，还需要对导入目的基因的受体细胞进行植物组织培养才能获得新性状的植株；

（2）将中间载体导入微生物时常先用钙离子处理微生物使其成为感受态，易于吸收中间载体，该种方法为感受态细胞法；由图可知，中间载体②上含卡那霉素抗性基因，而不含氨苄青霉素抗性基因，故含有中间载体②­PrbcS­*T的微生物能在含有卡那霉素的培养基中生长，而不能在含有氨苄青霉素的培养基中生长；

（3）由图可知，中间载体②的长度为2.7kb，经酶切后凝胶电泳，测得2B片段为0.4kb，设Prbcs­*T的长度为y，则2.7-0.4+y=4kb，解得y=1.7kb；根据图示中中间载体①­PrbcS­*T右侧的酶切位点和中间载体②-2B右侧的酶切位点可知，中间载体②­2B形成中间载体②­PrbcS­*T，需要使用限制酶HindⅢ和EcoRⅠ切割；

（4）可设计包含NcoⅠ识别序列的引物，然后用PCR技术扩增，即可在T基因前“点突变引入NcoⅠ”酶切位点。