Question

回答以下生产转基因抗虫棉花有关的问题：

(1)将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因与含有四环素抗性基因的质粒用相同的___________酶切，在切口处形成___________，然后用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成___________，获得重组质粒。

(2)用CaCl₂处理农杆菌，获取___________细胞。取CaCl₂处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成___________实验。在离心管中加入含有四环素的液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是___________，并大量增殖。

(3)取某品种棉花的叶，先进行___________然后接种到培养基中培养，棉花叶肉细胞发生___________形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因棉花。除运用分子检测手段检测以外，还可将___________接种到抗虫棉上，检验是否有抗虫特性，此过程需要用___________按照相同方法处理做对照。

Answer

限制性核酸内切酶 相同的平末端或黏性末端 磷酸二酯键 感受态细胞 转化 使CaCl2处理过的农杆菌从感受态恢复到细胞的正常状态，从而获得(具有且)表达四环素抗性基因的(转基因)农杆菌 消毒 脱分化 (棉铃)虫(或“昆虫”) 生长状况相同的同种普通棉花

【解析】

基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

(1)将苏云金芽孢杆菌的抗虫基因与含有四环素抗性基因的质粒用相同的限制性核酸内切酶酶切，在切口处形成相同的平末端或黏性末端，然后用DNA连接酶连接，在两个片段相邻处形成磷酸二酯键，获得重组质粒。

(2)用CaCl2处理农杆菌，获取容易接纳外源DNA的感受态细胞。取CaCl2处理过的农杆菌与重组质粒在离心管内进行混合等操作，使重组质粒进入农杆菌，完成转化实验。在离心管中加入含有四环素的液体培养基，置于摇床慢速培养一段时间，其目的是使CaCl2处理过的农杆菌恢复细胞的正常状态，获得表达四环素抗性基因的农杆菌，并大量增殖。

(3)取某品种棉花的叶，先进行外植体消毒，然后接种到培养基中培养，棉花叶肉细胞发生脱分化形成愈伤组织，并进行继代培养。用含重组质粒的农杆菌侵染愈伤组织，再培养愈伤组织，以便获得抗虫的转基因棉花。将虫子接种到生长状况相同的抗虫棉及起对照作用的普通棉花上，检验是否有抗虫特性，如果与普通棉花相比，抗虫棉花的虫害很轻，说明转基因取得成功。