Question

某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌（目的菌）。实验的主要步骤如下图所示。请分析回答下列问题。

（1）培养基中加入化合物A的目的是__________，这种培养基属于_________培养基。

（2）目的菌生长所需的氮源和碳源是来自培养基中的____________。实验需要振荡，培养，由此推测“目的菌”的代谢类型是_______。

（3）对培养基进行灭菌的常用是_______方法。用稀释涂布平板法测定密度时，实际活菌数要比测得的数目__________。

（4）某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10^-4、10^-5、10^-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组对照实验是______________，此对照实验的目的是____________________________。

（5）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量_______的培养液，接入新的培养液中连续培养，使目的菌的数量_______（两空选填增加或减少）

（6）实验结束后，使用过的培养基应该进行_______处理才能倒掉，这样做的目的是防止造成_______________。

（7）有同学将“目的菌”破碎并提取得到该菌蛋白质，利用凝胶过滤法分离蛋白质（如图），他在操作中加样的正确顺序是______________。

Answer

筛选目的菌 选择 化合物A 异养需氧型 高压蒸汽灭菌法 高 不接种的空白培养基 证明培养基制备过程中是否被杂菌污染 减少 增加 灭菌 对环境的污染 4→1→2→3

【解析】

培养基的成分：水、碳源、氮源、无机盐和生长因子等。

培养基按功能可分为选择培养基和鉴别培养基。

常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。

常用的灭菌方法：干热灭菌法、高压蒸汽灭菌法和灼烧灭菌法。

凝胶色谱法：指根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

（1）该实验是为了筛选可以分解化合物的细菌，故培养基中加入化合物A是为了筛选目的菌，该培养基属于选择培养基。

（2）培养基中的化合物可以为目的菌提供生长所需的氮源和碳源。实验需要振荡，培养，由此推测“目的菌”需要氧气，又因为它可以分解有机物A，故其代谢类型是异养需氧型。

（3）对培养基常采用高压蒸汽灭菌法处理。用稀释涂布平板法测定密度时，因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落，故实际活菌数要比测得的数目多。

（4）某同学计划统计污水池中“目的菌”的总数，他选用10-4、10-5、10-6稀释液进行平板划线，每种稀释液都设置了3个培养皿。从设计实验的角度看，还应设置的一组不接种的空白培养基作为对照实验，通过观察该培养基是否有菌落产生来判断培养基制备过程中是否被杂菌污染。

（5）培养若干天后，应选择培养瓶中化合物A含量减少的培养液（说明其中含有能分解化合物的微生物），接入新的培养液中连续培养，增加目的菌的数量。

（6）实验结束后，为了避免污染环境，使用过的培养基应该进行灭菌处理才能倒掉。

（7）凝胶色谱中样品的加入和洗脱：用吸管小心吸取1ml透析后的样品，加到色谱柱的顶端，加样后，打开下端出口，使样品渗入凝胶床内，等样品完全进入凝胶层后，关闭下端出口。加入磷酸缓冲液，连接缓冲液洗脱瓶打开下端出口进行洗脱。故对应的加样顺序是：4→1→2→3。