Question

从自然界筛选嗜盐菌的一般步骤是：采集菌样→富集培养→纯种分离→性能测定。

（1）培养嗜盐菌的菌样应从____________环境采集。

（2）富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境条件，使其在群落中的数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养方法。对嗜盐产淀粉酶微生物的富集培养应选择以________为唯一碳源的培养基，并在高盐条件下培养。在富集培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能__________。

（3）下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。

获得图A效果的接种方法是___________。获得图B效果的接种方法是__________，利用A的方法在5个平板上各接种稀释倍数为10³的菌液样品（涂布体积为0.2mL），培养一段时间后，平板上的菌落数分别为96、100、108、112、430，则每升原菌液样品中细菌数为___________

（4）采用固体平板培养细菌时要倒置培养的目的是____________________________。

Answer

高盐 淀粉 增加培养液中的溶氧量 稀释涂布平板法 平板划线法 5.2×108 防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基（或避免培养基中水分的过快挥发）

【解析】

1、微生物常见的接种的方法①平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养．在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落；②稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

2、统计菌落数目的方法（1）显微镜直接计数法 ①原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量；②方法：用计数板计数； ③缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法（活菌计数法） ①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作a、设置重复组，增强实验的说服力与准确性；b、为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数；③计算公式：每克样品中的菌株数=（c÷V）×M，其中c代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。噬盐菌的菌样应从高盐环境采集，如高盐海滩等。

（2）根据要求，对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高温条件下培养。培养过程中，需将锥形瓶放在摇床上振荡，目的有两个，一方面使菌株与培养液充分接触，提高营养物质的利用率；另一方面能增加培养液中的溶氧量。

（3）图A菌落分布较均匀 接种方法是稀释涂布平板，图B菌落集中呈线状，接种方法是平板划线法｡平板中菌落数在30-300以内进行计数，故每升原菌液样品中细菌数为：（96+100+108+112）÷4÷0.2×103×103=5.2×108。

（4）防止冷凝后形成的水珠滴落在培养基上污染培养基（或避免培养基中水分的过快挥发），故固体平板培养细菌时要倒置培养。