Question

枯草芽孢杆菌菌体可合成淀粉酶等消化酶，在消化道中与动物体内的消化酶类一同发挥作用，但在紫外线照射下可获得不能合成淀粉酶的突变体。研究发现紫外线处理时间过短，获得突变体不足，若紫外线处理时间过长，又会导致枯草芽孢杆菌大量死亡。为探究紫外线处理最佳时间，需测定经处理后的枯草芽孢杆菌的突变率和存活率。完成相关实验步骤：

（1）从临时保存菌种的___________培养基中挑取菌体，制成菌液，用稀释涂布平板法或_________方法测定枯草芽孢杆菌的浓度；

（2）____________________,分别用同等强度的紫外线灯处理1分钟、3分钟、5分钟；

（3）将每组处理后的菌液稀释适宜倍数，吸取一定量的菌液涂布在1个______________的培养基上，另取等量菌液涂布在1个牛肉膏蛋白胨培养基上。37℃培养48小时。

（4）计算每个平板上菌落数。牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数可用于计算________，其与另一种培养基上的菌落数的差值可用于计算_______________。

（5）为了使上述实验结果更精确可信，请提出一项改正措施____________________。

Answer

斜面 显微镜直接计数法 将菌液均分为3组 以淀粉为唯一碳源 存活率 死亡率（突变率） 每组至少涂布3个平板

【解析】

为了探究紫外光处理时间对枯草芽孢杆菌的突变率和存活率的影响，其大致设计思路是：首先测定起始菌液的枯草芽孢杆菌浓度；再对随机均分的菌液进行不同时间的紫外光处理，然后对其分别计数，并取出等量菌液接种在淀粉为唯一碳源的培养基上和完全培养基中进行对比培养，最后观察统计每组培养基上菌落的存活率和突变率。

（1）从临时保存菌种的斜面培养基中挑取菌体，制备成菌液，用稀释涂布平板法或显微镜直接计数的方法测定枯草芽孢杆菌的浓度。

（2）将菌液均分为三组，标记为A、B、C，分别用相同强度的紫外灯处理1min、3min、5min。

（3）将每组处理后的菌液稀释适宜倍数，根据实验目的，部分涂布在3个以淀粉为唯一碳源的培养基上作为实验组，另外一部分等量菌液涂布在3个牛肉膏蛋白胨培养基上作为对照组。

（4）一段时间后，计数每个平板上的菌落数。其中牛肉育蛋白胨培养基上的菌落数可用于计算存活率，另一种培养基上的菌落数可用于计算突变率。

（5）由于实验步骤中，在用稀释涂布平板法进行接种培养、计数时，每种时间处理后的菌液只接种在1个平板培养基上，这样带来的结果容易出现偶然性，可行度不高，所以最好每组至少涂布三个平板。