Question

草甘膦是一种广谱除草剂，其除草机制是抑制植物体内EPSPS酶的合成，影响植物正常生长，最终导致植物死亡。目前，发现可以从一种抗草甘膦的大肠杆菌突变株中分离出EPSPS基因，若将该基因转入植物细胞内，获得的转基因植物能耐受高浓度的草甘膦。取6株植物，其中，植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过转基因处理，但是否成功未知（转基因处理过程不影响植物正常生长）。图1为4种限制酶的识别序列和酶切位点，图2为含有目的基因的DNA片段及其具有限制酶切点。据图回答：

（1）若A、B、C浇清水，D、E、F浇含有草甘膦的水，则A～F植物中，一定能正常生长的是_________________。

（2）一个完整的基因表达载体除复制原点、启动子和终止子外，还应包括_________________。若利用酶切法获得目的基因，最应选择的限制酶是_________________和_________________。

（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，但植物F没有表现出抗性，分析可能的原因_________________。

Answer

A、B、C、E 目的基因、标记基因 MspⅠ SmaⅠ 目的基因没有成功表达

【解析】

根据题意分析可知：植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，所以A-C浇清水，都能健康成长。F虽经过了转基因处理，但是否成功还未知，所以D-F浇的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成长，E肯定能健康成长，F未知。一种限制酶能够识别双链DNA分子的某种特定核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断裂。

（1）根据题意分析可知：植物A和D对草甘膦敏感，B和E对草甘膦天然具有抗性，C和F则经过了转基因处理，所以A、B、C浇清水，都能健康成长。F虽经过了转基因处理，但是否成功还未知，所以D、E、F浇的水中含有草甘膦，D肯定不能健康成长，E肯定能健康成长，F未知。因此肯定能健康成长的是ABCE。

（2）一个完整的基因表达载体包括目的基因、复制原点、启动子、终止子和标记基因；根据图1可知，如果用MboⅠ酶进行切割，还会将BamHⅠ酶识别处的片段进行切割，因此只能选择限制酶MspⅠ和SmaⅠ切割目的基因。

（3）假设EPSPS基因已被成功转移到植物F中，说明F中已含有EPSPS基因，如果仍没有表现出抗性，则说明EPSPS基因在受体细胞中没有表达或表达的酶没有活性。