Question

有些酵母菌可以利用工业废甲醇作为碳源进行培养，这既可减少污染又可降低生产成本。研究人员拟从土壤样品中分离该类酵母并进行扩大培养，下图所示为操作流程。请回答下列问题：

(1)在配制培养基过程中，对培养基应采用____灭菌。若需要调节培养基的pH，应在灭菌_______（填“前”或“后”）进行。

(2)在步骤③中将温度大约为____（填“25℃”或“50℃”或“80℃”）的培养基倒入培养皿混匀，冷凝后倒置培养。为判断实验中的培养基是否起到了选择作用，可用含甲醇和其他碳源的培养基作对照组重复步骤③，若对照组的菌落数目明显____（填“大于”、“等于”、“小于”）实验组，则说明起到了选择作用。

(3)在操作④中划线的某个平板培养后，第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落。操作失误的原因可能是____。

(4)为重复利用筛选出的酵母，用海藻酸钠和氯化钙制成了包埋酵母的多孔状凝胶珠。实验表明：凝胶珠孔径太大或太小，发酵效率都很低。请简要分析其原因______________。

(5)酵母菌分解甲醇与某种蛋白质类酶密切相关，研究人员拟用凝胶色谱法从酵母菌蛋白质提取液中分离出该酶。在装填凝胶时要尽量紧密，不得有气泡存在。因为气泡会______________，降低分离效果。

Answer

高压蒸汽灭菌 前 50 大于 第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却（或划线未从第一区域末端开始） 孔径太大，酵母菌易漏出；孔径太小，不利于反应物与酵母菌充分接触 搅乱洗脱液中蛋白质的洗脱次序

【解析】

常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。

常用的接种方法：平板划线法、稀释涂布平板法。

分离蛋白质的方法：凝胶色谱法—根据相对分子质量的大小分离蛋白质的有效方法。

（1）对培养基应该选择高压蒸汽灭菌法进行灭菌，灭菌前应该先调节其pH，然后再灭菌。

（2）倒平板的适宜温度是50度，冷凝后再倒置培养可以避免培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染。实验组培养基中以甲醇作为唯一碳源，对照组可以用含甲醇和其他碳源的培养基作对照组重复步骤③，预期的结果是对照组不仅能利用甲醇的微生物可以生长，其他的也可以生长，故菌落数会多于实验组。

（3）步骤④进行平板划线法处理，该过程中为了避免杂菌污染，每次划线前后都有灼烧接种环，为了避免高温杀死菌种，需要等接种环冷却后再划线，若第一划线区域的划线上都不间断地长满了菌落，其他区域的划线上却均无菌落，可能是第一区域划线结束，接种环灼烧后未冷却，高温杀死了菌种。

（4）孔径太大，酵母菌易漏出；孔径太小，不利于反应物与酵母菌充分接触，故凝胶珠孔径太大或太小，发酵效率都很低。

（5）凝胶色谱法分离蛋白质时，若装填凝胶时有气泡存在，会影响蛋白质的洗脱次序，降低分离效果，故不能有气泡存在。